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目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒对胶质瘤细胞系U251的抑制作用。
方法:用优选靶序列siRNA 850构建siRNA表达质粒pGPU6/GFP/Neo-shFGF2,然后采用脂质体介导的方法转染入高表达bFGF的胶质瘤细胞系U251细胞内。根据绿色荧光蛋白表达情况检测转染效果,同时应用MTT法观察转染细胞的增殖活性的变化,以寻找最佳转染条件。应用RT-PCR法检测转染细胞mRNA表达的变化。用Annexin V-FITC/PI双色标记的流式细胞仪法检测转染细胞的凋亡状态。
结果:绿色荧光蛋白表达情况表明:siRNA表达质粒可通过脂质体介导作用成功转染入胶质瘤细胞系U251细胞内。MTT结果显示:MTT吸收值在转染后48小时和72小时下降,与正常对照组和阴性对照组相比都具有统计学意义。RT-PCR结果显示:转染了不同浓度siRNA表达质粒的细胞mRNA表达均受抑制。流式细胞分析结果表明:实验组在转染后48小时对早期细胞凋亡有明显的诱导作用,对晚期细胞凋亡也有一定的诱导作用。
结论:用优选靶序列siRNA 850构建的siRNA表达质粒能够有效抑制细胞内bFGF基因mRNA的表达,并抑制胶质瘤细胞系U251的增殖,本实验结论为多基因联合基因治疗胶质瘤奠定基础。