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目的研究CRAF在肝癌组织中的表达情况,探讨肝癌细胞中CRAF的表达对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响,为阐明CRAF促进肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的相关作用机制奠定基础,并为临床靶向治疗的潜在靶点提供新的思路。方法1.采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测肝癌组织和其癌旁组织中CRAF的表达情况。2.采用蛋白质印迹方法分析HepG2、QGY7703和SMMC-7721肝癌细胞中CRAF的表达含量,并选择合适的细胞株。3.采用RNA干扰实验转染shRNA进入SMMC-7721肝癌细胞,下调CRAF表达,通过蛋白质印迹方法检测CRAF的表达,确定下调的效果。4.采用MTT法、体外克隆形成实验检测沉默CRAF对肝癌细胞体外增殖的影响。5.采用细胞划痕实验检测沉默CRAF对肝癌细胞体外迁移的影响,采用Transwell实验检测CRAF对肝癌细胞体外侵袭的影响。6.采用蛋白质印迹方法分析沉默CRAF后对MMP-2,MMP-9的影响。结果免疫组织化学实验结果显示与癌旁组织相比,肝癌组织中CRAF的表达阳性率明显增多;Western Blot实验结果显示SMMC-7721为CRAF高表达的肝癌细胞,可用于后续RNA干扰实验。转染shRNA下调SMMC-7721肝癌细胞中的CRAF。MTT实验和克隆形成实验的体外增殖实验结果显示下调CRAF后肝癌细胞的增殖能力和克隆形成能力与对照组相比均有所下降(p<0.05),细胞划痕实验、Transwell实验的体外迁移侵袭实验结果显示下调CRAF后的肝癌细胞组与对照组相比迁移侵袭能力均有所下降(p<0.05)。Western Blot实验结果显示下调CRAF后肝癌细胞组与对照组相比MMP-2,MMP-9的表达明显降低(p<0.05)结论1.肝癌组织中CRAF的表达明显高于癌旁组织。2.CRAF在肝癌细胞系SMMC-7721中高表达,使用shRNA沉默CRAF能抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭的能力。3.沉默CRAF能下调MMP-2,MMP-9等与侵袭迁移有关的蛋白表达水平。