【摘 要】
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本实验以核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)为实验菌株,在含有不同碳源和氮源的培养基中培养核盘菌后,确定产EPSP合成酶的最适碳源和最适氮源分别为蔗糖和硝酸
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本实验以核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)为实验菌株,在含有不同碳源和氮源的培养基中培养核盘菌后,确定产EPSP合成酶的最适碳源和最适氮源分别为蔗糖和硝酸铵.对AROM蛋白复合体中的EPSP合成酶的酶学性质研究的实验结果表明,该酶酶促反应的最适温度为30℃,最适pH值为7.2;60℃以下相对酶活均保持在60﹪以上;在pH6.7~7.5范围内,它的活性较为稳定;单价的金属离子K+和化合物EDTA对它有一定的激活作用,而脲对它的抑制作用最明显,其次是Mg<2+>和Mn<2+>;约12.346μmol/L的草甘膦就可以抑制50﹪的酶活性.动力学分析表明这种EPSP合成酶的两种底物在低浓度时符合米氏动力学,而在高浓度情况下对酶活性有一定的抑制作用;作图法初步鉴定该EPSP合成酶的反应机制为序列机制;Hill作图表明它是一种具有负协同效应的别构酶,因此求得的动力学常数均为表观常数,其中K<,m>(PEP)为140.28μmol/L,K<,m>(S3P)为138.89μmol/L;草甘膦对于底物PEP是竞争性抑制剂,其表观抑制常数K<,i>(GLP对PEP)为0.322μmol/L,而对于另一种底物S3P则表现为没有抑制作用;该EPSP合成酶受温度的影响较大,在未反应情况下的失活活化能为408.16kJ/mol.
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