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目的:探索H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛及气虚、中期阳气虚、中晚期气阴阳虚4个常见证候在睾丸基因表达层面的物质基础。
方法:采用荷瘤小鼠标准化四诊及辨证方法,以及Affymetrix公司的GeneChip Mouse Exon1.0 ST Array等技术,检测正常对照及H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证及气虚证,中期阳气虚证,中晚期气阴阳虚证三个阶段的4个常见证候睾丸组织基因表达谱的情况。对获得的芯片数据进行分析,从中筛选出差异表达及高表达基因,查阅国内外最新文献,分析这些差异表达基因的功能及其表达的意义。
结果:
(1)肿瘤发生后各证候组一致上调的基因5个,一致下调的基因12个。上上调基因中Serpina3n、Ly6cl、Saa3与免疫有关,Saa3在中晚期气阴阳诸虚证上调数十倍!下调基因中Agt、Hsd17b3、Sultlel、Star、Klklb27、Akrlb7功能报道与雄激素有关。
(2)筛选到与雄激素合成有关基因10个。其中Star肿瘤发生后各证候均下调;Cypllal、Hsd3b2、Cyp17al在中期阳气虚证及中晚期气阴阳虚证下调。
(3)早期阶段2个证候一致差异表达基因178个。部分上调基因与肿瘤发生、转移等有关;下调基因150个,功能涉及范围广,部分与精子发生有关。
(4)早期邪毒壅盛证差异表达基因13个。上调基因8个,在邪毒壅盛证高表达;下调基因5个。
(5)早期气虚证差异表达基因5个。上调的基因有4个,其中Gpx5、Lcn5仅在气虚证高表达,其它组表达几乎关闭;下调基因仅Klk1b26。
(6)中期阳气虚证下调基因3个,无上调基因。
(7)中晚期气阴阳虚证差异表达基因7个。下调基因5个在邪毒证高表达;上调的基因2个。
结论:
(1)不同证候荷瘤小鼠睾丸存在一致上调和下调表达的基因,推测这些基因与肿瘤疾病有关。
(2)荷瘤小鼠中晚期气阴阳虚证,部分与雄激素合成相关的基因下调。
(3)荷瘤小鼠早期阶段,部分与精子发生相关的基因下调。
(4)肿瘤发生后早期阶段睾丸基因差异表达明显,而中期及中晚期差异表达不明显。其中邪毒壅盛证等4个证候有其特异性差异表达的基因谱,推测这些基因表达的改变与荷瘤小鼠同病异证的形成有关。