胰蛋白酶(EC3.4.21.4)是属于丝氨酸蛋白酶(serine proteases)家族的一种，并由胰腺分泌。本研究论文利用基因工程技术获得了重组猪源阳离子型胰蛋白酶原(rPTg)的表达菌株，论文分别对其表达培养条件优化，酶原包涵体纯化，复性，蛋白纯化及性质进行了研究。同时还对重组猪胰蛋白酶(rPT)的质量检定，稳定性，应用性进行了初步研究。　　 通过单因素和Plackett-Burman实验确定了表达菌的最佳培养诱导条件：诱导温度30℃，诱导时间4h，IPTG浓度0.5mmol/L，Ca2+离子浓度3mmol/L。最优条件下的表达量为20.5％。　　 洗涤纯化重组猪胰蛋白酶包涵体，其纯度达到80％以上；复性后进行纯化，确定了CM柱纯化条件；研究了重组猪胰蛋白酶的性质：最适pH值为9.0，最适温度为60℃，pH3.0～pH5.0之间较稳定，低温条件较稳定(4℃以下)，Ca2+有利于维持酶活的相对稳定性，加入Mn2+，Ni2+，Co2+，Cu2+，Ba2+，Mg2+，Zn2+，都会对酶活造成不同程度的损失，酶活性受EDTA抑制，Km和Vmax值为0.01mmol/L和3300μmol/min。　　 确定了重组猪胰蛋白酶的最佳冻干保护剂为甘露醇，发现.20℃、4℃的酶活保留率4个月后分别为95％，90％左右，而室温下酶活损失严重，只剩下40％。　　 紫外光谱扫描显示重组猪胰蛋白酶最大吸收峰值在278 nm附近，与猪胰腺提取的胰蛋白酶基本一致；测定重组猪胰蛋白酶宿主菌蛋白质残留量为2.46ng/ml，占样品总蛋白的0.0329％，符合生物制品的要求；重组猪胰蛋白酶对干酪素水解的最大水解度低于提取猪胰蛋白酶，测定证明了提取猪胰蛋白酶中含有糜蛋白酶的原因。二者酶解激活羧肽酶B的效果差别不大。　　 重组胰蛋白酶细胞消化液保存在-20℃稳定性最好，最后确定成分为PBS缓冲液+0.01％EDTA+2kU/ml的细胞消化液消化Hela细胞效果最好，在2min之内就能消化完全，而且转接培养后生长良好。高酶活的细胞消化液容易对细胞有毒性，会杀死细胞。