【摘 要】
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目的:1.检测自噬相关基因在类风湿关节炎患者外周血表达并探讨其与临床指标间的相关性;2.对比使用TNF-α抑制剂治疗前后患者临床指标与自噬相关基因变化,探讨TNF-α抑制剂对类风湿关节炎患者病情及自噬相关基因的影响。方法:1.收集59例类风湿关节炎患者(RA组)和55例健康对照者(HC组)外周血标本,提取外周血单个核细胞(Peripheral lood mononuclear cells,PBMC
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目的:1.检测自噬相关基因在类风湿关节炎患者外周血表达并探讨其与临床指标间的相关性;2.对比使用TNF-α抑制剂治疗前后患者临床指标与自噬相关基因变化,探讨TNF-α抑制剂对类风湿关节炎患者病情及自噬相关基因的影响。方法:1.收集59例类风湿关节炎患者(RA组)和55例健康对照者(HC组)外周血标本,提取外周血单个核细胞(Peripheral lood mononuclear cells,PBMCs)中RNA和蛋白质,应用实时荧光定量聚合酶链反应技术(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)技术检测自噬相关基因(Atg)3、Atg5、Atg12、Atg16以及Beclin-1、LC-3在两组研究对象中的表达,并与临床指标做相关性分析;2.收集15例初诊未经正规治疗且病情处于中、重度活动期类风湿关节炎患者使用TNF-α抑制剂治疗前后临床资料及外周血标本,对比其治疗前后临床指标及上述基因改变情况。结果:1.RA组中性粒细胞、血沉、超敏C反应蛋白明显高于HC组;淋巴细胞低于HC组(P<0.05)。2.检测两组自噬相关基因mRNA表达水平,发现RA组Atg3、Atg12、LC-3表达水平均高于HC组(P<0.05);Atg16表达水平低于HC组(P<0.05);两组Beclin-1和Atg5在mRNA表达水平无差异(f>0.05)。3.自噬相关基因mRNA表达水平与临床资料做相关性分析发现,RA组Atg3表达水平与白细胞、中性粒细胞、关节压痛数、RA疾病活动度评分(DAS28)之间呈负相关(P<0.05);Atg12表达水平与白细胞、中性粒细胞呈负相关;Beclin-1表达水平与白细胞、中性粒细胞、单核细胞呈负相关;LC-3表达水平与血沉、关节肿胀数呈正相关(P<0.05);Atg5和Atg16与各临床指标间未发现相关(P>0.05)。HC组中上述自噬相关基因与各临床指标间未发现相关(P>0.05)。4.检测两组自噬相关基因的蛋白表达,发现RA组Atg16LI、LC-3B蛋白表达高于 HC 组(P<0.05),Atg3、Atg5、Atg12、Beclin-1 表达无明显差异(P>0.05)。5.RA组患者经TNF-α抑制剂治疗后白细胞、中性粒细胞、血沉、超敏C反应蛋白、关节压痛数、关节肿胀数、DAS28显著降低(f<0.05),淋巴细胞、单核细胞未见明显变化(P>0.05)。6.RA组患者使用TNF-α抑制剂治疗前后比较,Atg3、Atg12、LC-3在mRNA表达水平降低(P<0.05),Atg16表达水平升高(P<0.05),Atg5、Beclin-1表达无明显差异(P>0.05)。7.RA组患者使用TNF-α抑制剂治疗前后比较,Atg16L1、LC-3B蛋白水平显著降低(P<0.05),Atg3、Atg5、Atg12、Beclin-1未见明显差异(P>0.05)。结论:1.RA患者体内存在自噬相关基因的异常,推测自噬在类风湿关节炎发病机制中可能发挥作用;自噬相关基因与部分临床指标存在相关性,提示自噬可能与RA患者病情密切相关。2.使用TNF-α抑制剂后,患者炎症指标、DAS28评分显著减低,提示TNF-α抑制剂可显著改善RA患者病情,降低患者病情活动度。3.使用TNF-α抑制剂后,RA患者自噬相关基因发生改变,推测TNF-α抑制剂可能通过改变RA患者自噬水平,改善患者病情。
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