目的:脾气虚影响心脏泵血功能已有研究,但其发生机制是否与线粒体损伤,特别是与线粒体未折叠蛋白反应是否相关尚未可知。本研究通过观察左心室射血功能、尾动脉血压、左心室肌细胞线粒体的形态和功能及线粒体未折叠蛋白反应等,探讨脾气虚上扰心主血脉的可能机制。材料与方法:1.实验动物与分组选择16只SPF级SD雄性大鼠,经适应性饲养1周后,根据随机数字表平均分为正常组和脾气虚证模型组（模型组）,每组各8只。2.脾气虚模型复制与评价2.1复制模型组大鼠采用饮食失节法加劳倦刺激法:即饱食24h后禁食48h,循环5次,共15d,全程自由饮水;同时每日于35～37℃水中游泳至力竭。2.2评价（1）消瘦:测量大鼠空腹体质量,当模型组明显低于正常组为达标;（2）纳差:代谢笼记录24h大鼠日进食量,模型组明显低于正常组为达标;（3）神疲乏力:模型组双前肢抓力和5min旷场实验中运动距离和站立次数均显著少于正常组;（4）皮毛枯槁:三人分别独立评价并结果一致,筛除未达标大鼠。3.大鼠尾动脉血压检测采用鼠尾动脉无创测压法。每只大鼠在同一时间段内,均由同一人间隔3min测量5次尾动脉的收缩压,取5次的平均值进行记录。4.大鼠心脏超声检查大鼠经过10%水合氯醛腹腔麻醉后,于左室短轴乳头肌平面进行检测,并同步记录心率。通过图像采集测量左心室舒张末期容积、左心室收缩末期容积、左室舒张末期内径、左室收缩末期内径,按照公式计算左室射血分数（left ventricleejection fraction,LVEF）和左室短轴缩短率（left ventricle fraction shortening,LVFS）。5.取材大鼠禁食24h,经过10%水合氯醛腹腔麻醉,腹部备皮,剪开胸腔取心脏,切取心脏组织-80℃冻存备用。6.左心室肌细胞线粒体超微结构观察4℃下切取1cm3组织,2.5%戊二醛固定24h,PBS缓冲液漂洗,1%锇酸固定,乙醇、丙酮梯度脱水后环氧树脂包埋、制片,3%醋酸铀-枸橼酸铅双重染色,透射电镜观察拍片。7.左心室肌细胞线粒体功能评价取部分心室肌组织,按试剂盒说明书提取线粒体,分别检测并计算三磷酸腺苷（adenosine triphosphatase,ATP）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平。8.左心室肌细胞未折叠蛋白反应相关成分表达采用蛋白质印迹法检测心肌细胞线粒体内的Lon蛋白酶（Lon protease,Lon P）和酪蛋白裂解酶XP（caseinolytic protease XP,Clp XP）复合物（包括Clp X和Clp P）等表达。9.数据处理本实验所得出的数据资料以均数±标准差（—X±s）表示,组间通过SPSS17.0统计软件的t检验分析比较,P<0.05为有统计学意义。结果:1.脾气虚大鼠造模结果与正常组比较,模型组大鼠体质量下降,24h进食水量减少,双前肢抓力下降,旷场中运动距离和站立次数均明显下降。另,三人均独立判定模型组毛色枯槁,显示脾气虚模型复制成功。2.大鼠尾动脉血压及心脏超声检查结果与正常组比较,模型组的心率、收缩压、舒张压、左室射血分数和左室短轴缩短率等5个指标均下降,并具有统计学意义（P<0.01）。3.左心室肌细胞线粒体超微结构变化结果两组线粒体均多呈卵圆形,边缘清楚,无肿胀、变性及空泡现象;嵴呈片状,层次丰富且清晰。但与正常组比较,模型组线粒体内部出现明显致密颗粒,且相互交织。4.左心室肌细胞线粒体功能评价结果与正常组相比,模型组ATP含量下降,MDA水平上升,均有统计学意义（P<0.01）。5.左心室肌细胞未折叠蛋白反应相关成分表达与正常组相比,模型组Lon P和Clp X表达上调,均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,但Clp P表达变化不明显,没有统计学差异。结论:1.脾气虚所致心主血脉功能受损的现代医学机制与心肌工作细胞线粒体未折叠蛋白反应未充分启动所导致的线粒体蛋白失稳态有关。