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癌症是威胁人类健康的第二大疾病，征服癌症是科学家们的一大梦想。天然产物一直是发现新药和药物先导化合物的重要途径之一，很多抗癌药物都是直接或间接来源于天然产物。紫杉醇(Paclitaxe1)是从红豆杉科红豆杉属植物中提取得到的二萜类化合物，是目前已发现的效果最好的天然抗癌药物之一，在临床上已经广泛用于乳腺癌、卵巢癌和部分头颈癌和肺癌的治疗。紫杉醇作为一个具有抗癌活性的二萜生物碱类化合物，其新颖复杂的化学结构、广泛而显著的生物活性、全新独特的作用机制、奇缺的自然资源使其受到了植物学家、化学家、药理学家、分子生物学家的极大青睐，使其成为举世瞩目的抗癌明星和研究重点。
紫杉醇作为一种重要的细胞毒性因子，对多种癌症具有良好的疗效，在临床上使用非常广泛。当前研究较为成熟已经批准上市的紫杉醇剂型均为注射用产品，分别为：紫杉醇注射液(商品名：泰素)、注射用紫杉醇(白蛋白结合型)(商品名：Abraxane?)、注射用紫杉醇聚合物胶束(商品名：Genexol?-PM)、紫杉醇脂质体(力扑素)。①紫杉醇注射液(商品名：泰素)，美国食品药品监督管理局(FDA)1992年批准在美国上市，由百时美施贵宝公司研制生产，由于处方中添加了增溶剂聚氧乙烯蓖麻油，致使该制剂具有诸多缺陷：A)过敏反应频发：聚氧乙烯蓖麻油为活性物质，使机体释放出具有过敏作用的组胺，从而导致过敏反应的发生，其过敏反应出现的概率超过40%，致人死亡的报道也屡见不鲜，故过敏反应是泰素最大的安全隐患；B)与输液器具相容性较差：聚氧乙烯蓖麻油为表面活性剂，能够溶解出输液袋及输液管路中所含的增塑剂(邻苯二甲酸二(2一乙基)己酯)，对人体肝肾功能与生殖功能造成损伤；C)用药不方便：为了避免或减少过敏反应的发生，用药前需准备一些抗过敏反应的药物和设备，以便于随时急救，并根据情况严格控制输液滴速，若出现过敏反应应及时停药，积极抢救，专人护理，做好抢救记录，使用极其繁琐；②注射用紫杉醇(白蛋白结合型)，该制剂是将紫杉醇用人血白蛋白包裹制成的纳米冻干粉针剂，亦不含任何有毒副作用的表面活性剂与增溶剂，有效避免了泰素中由于含聚氧乙烯蓖麻油而引起的过敏反应，是继泰素后最好的紫杉醇注射剂，但其价格昂贵，大大增加了患者的经济负担。③注射用紫杉醇聚合物胶束，是将紫杉醇通过高分子聚合物材料聚乙二醇单甲醚-聚乳酸包裹而制备的胶束制剂，该聚合物属增溶剂，其体内过程以及安全性尚未研究透彻，有待临床进一步研究；④紫杉醇脂质体(力扑素)，也不含有聚氧乙烯蓖麻油，但其质量可控性较差，粒径分布较宽，从几百纳米到几个微米不等，目前用于临床的紫杉醇注射剂均存在诸多的缺陷与不足。此外紫杉醇的口服给药制剂也是研究的热点，已有产品已经进入临床试验阶段，预计在不久的将来将获得突破。除口服紫杉醇制剂，紫杉醇的前体药物、凝胶剂和糊剂、纳米粒、乳剂、环糊精包合体、药物洗脱支架等一些新的剂型也有研究和报道。
为降低聚氧乙烯蓖麻油的副作用，人们开发了多种紫杉醇药物传递系统，如环糊精包合物、微囊、微球、亚微乳和聚合物纳米粒等，但以这些传递系统制成的制剂，存在着药物渗漏、体内药物的突释行为以及聚合物的毒性等问题。因此，本课题旨在制备一种乳剂稀释用紫杉醇注射液，拟研究的注射液由紫杉醇药物溶液与脂肪乳剂两部分组成，邻用时将紫杉醇溶液分散到脂肪乳剂中，形成相对稳定的脂肪乳剂分散液本文主要包括以下几个部分：
1.紫杉醇溶液的处方筛选
首先以紫杉醇溶液在脂肪乳剂中的分散稳定性为指标，从常用的可注射溶媒如无水乙醇，丙二醇，聚乙二醇中筛选出最适溶媒。
聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)又名聚乙烯二醇或聚氧乙烯二醇，为多元醇的聚合物，由环氧乙烷与水或乙二醇逐步加成聚合得到的以羟基结尾的线性或分支状聚醚高分子化合物。聚合度的不同会引起相对分子质量、性质、用途的差异，制剂用PEG，PEG200，PEG300，PEG400，PEG600，PEG2000，PEG4000，PEG6000，PEG8000，PEG20000等在中药制剂中应用广泛，且适应性好。PEG作为重要的水溶性药用辅料，涉及各类中药制剂的制备，多用于软胶囊剂、注射剂、栓剂、片剂、软膏剂、滴丸剂、巴布剂等多种中药制剂的不同剂型中PEG用作注射液的溶剂可提高药物溶解度，对遇水不稳定的药物兼有稳定作用。可选用特定浓度的PEG400，以制成稳定的注射液。水飞蓟宾黄酮类化合物(SLB)在各种类型肝损伤方面起到了良好的预防与治疗作用，常见临床口服剂型有片剂、胶囊剂等，为了克服SLB溶剂口服生物利用度低、首过效应严重等问题，周琴琴以PEG400作为SLB溶剂。以微乳作为给药载体制备灯盏花素微乳注射液，测定微乳稳定性参数(Ke)值为4.0%，稳定性远高于甘油、1，2－丙二醇、无水乙醇作助乳化剂，在增加药物溶解度的基础上提高了药物稳定性，避免了临床给药时药物析出沉淀。PEG因特有的水溶性、无毒性、免疫学惰性和分子大小可改变性等特点，现已成为应用最广泛的长循环修饰材料，PEG可修饰小分子药物，现以抗肿瘤药物为主，如紫杉醇、喜树碱、18β－甘草次酸(18β－GA)等。PEG广泛于中药药用辅料，同时也具有隐含的不良影响，小分子药物经修饰后，能显著改善或提高难溶药物的水溶性、提高其生物活性。然而，载体在PEG化修饰后，其在体内的药代动力学行为不可预测的变化可能发生;PEG的不可生物降解性和有氧环境中易降解性可能会产生不利影响，注射用PEG作溶剂有不同程度的溶血作用。PEG修饰药物的新技术已进入实际应用阶段，其新型药物传递系统正逐步应用于药物的开发与研制中，是使用极为广泛的药用辅料。
结果显示同浓度的PEG400做为溶剂其溶液在脂肪乳中的分散稳定性好，初步拟定PEG400作为溶媒；以PEG400溶液在脂肪乳中的分散稳定性为指标，筛选pH值调节剂枸橼酸用量，确定pH为3-5时溶液稳定性最好。
2.PEG400溶液制备工艺考察
通过对处方的筛选以及溶解温度、温度耐受性、活性炭吸附试验、灭菌条件等工艺进行考察，确定了最佳的处方和制备工艺。本研究工艺过程为首先取适量的PEG溶液加热至50±5℃，将配方量的紫杉醇原料和无水枸橼酸加入后混匀溶解，加入活性炭进行吸附，去除样品溶液中内毒素，脱碳处理后进行除菌过滤，最终成为无菌紫杉醇注射液，临用时用注射用20%中/长链脂肪乳作稀释剂配制而成的一种新的给药系统，增加紫杉醇的溶解度达到临床用药的有效浓度，不仅避免了使用蓖麻油的毒副作用，而且同时补充了患者的营养。该给药系统，不含任何表面活性剂，通过加入无水柠檬酸作为稳定剂，制备工艺简单、质量可控、成本低廉。
3.紫杉醇注射液质量标准建立和方法的验证
对制得的紫杉醇注射液进行了详细的质量研究，根据中国药典2015年版(通则0102)对注射液的要求，依据产品特性参考市售紫杉醇注射液质量标准，本论文建立了脂肪乳稀释型紫杉醇注射剂的质量标准。检测项目包括：(1)建立了紫杉醇注射液的含量测定方法并进行了方法学验证。(2)建立了有关物质测定方法并进行了方法验证。通过对USP40与Ch.P(2015年版)有关物质方法比较及对流动相比例的调整，确定了最佳检测条件。(3)分别采用薄膜过滤法、凝胶法进行了无菌检查和内毒素检查；以有关物质含量变化为指标，比较不同pH值样品稳定性的影响，并分别对水分、渗透压、不溶性微粒对有关物质的影响进行了研究。
按照建立的脂肪乳稀释型紫杉醇注射剂的质量标准，我们对三批自制产品进行全检，对紫杉醇注射液进行高温(60℃)30天影响因素试验，40℃加速试验6个月，25℃长期试验9个月，考察其性状、pH值、水分、不溶性微粒、可见异物、含量、细菌内毒素等指标，结果表明各项检测指标均符合规定。
20%中/长链脂肪乳注射液是临床常用的静脉营养补充剂，可提供人体营养所需的能量和必需脂肪酸，具有如下优点：应用历史悠久、应用广泛、安全性高、生产厂家多(国内有10余家中/长链脂肪乳注射液生产厂家，如广州百特侨光医疗用品有限公司、华瑞制药有限公司、贝朗医疗(苏州)有限公司、辰欣药业股份有限公司等，临床应用广泛，货源充足，易于购得)。故本研究的乳剂稀释用紫杉醇注射液，选用中/长链脂肪乳注射液作为稀释剂。
4.乳剂稀释用紫杉醇注射液药代动力学研究
考察不同乳剂稀释用紫杉醇注射液在SD大鼠体内药代动力学，不同厂家(华瑞药业、贝朗药业、鲁抗药业、百特侨光药业)生产的脂肪乳制备的紫杉醇乳剂在SD大鼠体内的药代动力学过程基本一致，从不同时间点紫杉醇的血药浓度动态变化的平均AUC的比值结果(处于0.8～1.2范围内)，从一定程度上说明不同厂家生产的脂肪乳制备的紫杉醇乳剂对紫杉醇SD大鼠体内的药代动力学特征没有明显影响。
综上所述，本研究制备一种新型的脂肪乳剂稀释型的紫杉醇注射液，该制剂包括药物、PEG400溶液和空白脂肪乳剂，是一种新型的、安全的、不含聚氧乙烯蓖麻油的乳剂稀释用紫杉醇注射液，该制剂是将紫杉醇溶解在注射用溶媒聚乙二醇400中，并添加适量的无水枸橼酸制备而成的紫杉醇溶液，不含任何表面活性剂，临用时，只需将该溶液注入临床上广泛用于营养补充剂的20%中/长链脂肪乳注射液中，摇匀，即可静脉滴注。本研究利用了脂肪乳剂的乳微粒吸附特性以及相似相溶原理，临用时将紫杉醇转载在乳微粒上，形成较稳定的乳剂分散液，为解决难溶性药物和其传统制剂所存在的弊端，扩大纳米载体可包裹药物的范围，解决传统载药脂肪乳剂的稳定性差和网状内皮系统吞噬的问题提供了依据。同时对于包装材料、输液器都无特殊要求，使用更方便，还能补充患者的营养，改善了过敏反应带来的临床风险和依从性，临床用药更安全、简便。
紫杉醇作为一种重要的细胞毒性因子，对多种癌症具有良好的疗效，在临床上使用非常广泛。当前研究较为成熟已经批准上市的紫杉醇剂型均为注射用产品，分别为：紫杉醇注射液(商品名：泰素)、注射用紫杉醇(白蛋白结合型)(商品名：Abraxane?)、注射用紫杉醇聚合物胶束(商品名：Genexol?-PM)、紫杉醇脂质体(力扑素)。①紫杉醇注射液(商品名：泰素)，美国食品药品监督管理局(FDA)1992年批准在美国上市，由百时美施贵宝公司研制生产，由于处方中添加了增溶剂聚氧乙烯蓖麻油，致使该制剂具有诸多缺陷：A)过敏反应频发：聚氧乙烯蓖麻油为活性物质，使机体释放出具有过敏作用的组胺，从而导致过敏反应的发生，其过敏反应出现的概率超过40%，致人死亡的报道也屡见不鲜，故过敏反应是泰素最大的安全隐患；B)与输液器具相容性较差：聚氧乙烯蓖麻油为表面活性剂，能够溶解出输液袋及输液管路中所含的增塑剂(邻苯二甲酸二(2一乙基)己酯)，对人体肝肾功能与生殖功能造成损伤；C)用药不方便：为了避免或减少过敏反应的发生，用药前需准备一些抗过敏反应的药物和设备，以便于随时急救，并根据情况严格控制输液滴速，若出现过敏反应应及时停药，积极抢救，专人护理，做好抢救记录，使用极其繁琐；②注射用紫杉醇(白蛋白结合型)，该制剂是将紫杉醇用人血白蛋白包裹制成的纳米冻干粉针剂，亦不含任何有毒副作用的表面活性剂与增溶剂，有效避免了泰素中由于含聚氧乙烯蓖麻油而引起的过敏反应，是继泰素后最好的紫杉醇注射剂，但其价格昂贵，大大增加了患者的经济负担。③注射用紫杉醇聚合物胶束，是将紫杉醇通过高分子聚合物材料聚乙二醇单甲醚-聚乳酸包裹而制备的胶束制剂，该聚合物属增溶剂，其体内过程以及安全性尚未研究透彻，有待临床进一步研究；④紫杉醇脂质体(力扑素)，也不含有聚氧乙烯蓖麻油，但其质量可控性较差，粒径分布较宽，从几百纳米到几个微米不等，目前用于临床的紫杉醇注射剂均存在诸多的缺陷与不足。此外紫杉醇的口服给药制剂也是研究的热点，已有产品已经进入临床试验阶段，预计在不久的将来将获得突破。除口服紫杉醇制剂，紫杉醇的前体药物、凝胶剂和糊剂、纳米粒、乳剂、环糊精包合体、药物洗脱支架等一些新的剂型也有研究和报道。
为降低聚氧乙烯蓖麻油的副作用，人们开发了多种紫杉醇药物传递系统，如环糊精包合物、微囊、微球、亚微乳和聚合物纳米粒等，但以这些传递系统制成的制剂，存在着药物渗漏、体内药物的突释行为以及聚合物的毒性等问题。因此，本课题旨在制备一种乳剂稀释用紫杉醇注射液，拟研究的注射液由紫杉醇药物溶液与脂肪乳剂两部分组成，邻用时将紫杉醇溶液分散到脂肪乳剂中，形成相对稳定的脂肪乳剂分散液本文主要包括以下几个部分：
1.紫杉醇溶液的处方筛选
首先以紫杉醇溶液在脂肪乳剂中的分散稳定性为指标，从常用的可注射溶媒如无水乙醇，丙二醇，聚乙二醇中筛选出最适溶媒。
聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)又名聚乙烯二醇或聚氧乙烯二醇，为多元醇的聚合物，由环氧乙烷与水或乙二醇逐步加成聚合得到的以羟基结尾的线性或分支状聚醚高分子化合物。聚合度的不同会引起相对分子质量、性质、用途的差异，制剂用PEG，PEG200，PEG300，PEG400，PEG600，PEG2000，PEG4000，PEG6000，PEG8000，PEG20000等在中药制剂中应用广泛，且适应性好。PEG作为重要的水溶性药用辅料，涉及各类中药制剂的制备，多用于软胶囊剂、注射剂、栓剂、片剂、软膏剂、滴丸剂、巴布剂等多种中药制剂的不同剂型中PEG用作注射液的溶剂可提高药物溶解度，对遇水不稳定的药物兼有稳定作用。可选用特定浓度的PEG400，以制成稳定的注射液。水飞蓟宾黄酮类化合物(SLB)在各种类型肝损伤方面起到了良好的预防与治疗作用，常见临床口服剂型有片剂、胶囊剂等，为了克服SLB溶剂口服生物利用度低、首过效应严重等问题，周琴琴以PEG400作为SLB溶剂。以微乳作为给药载体制备灯盏花素微乳注射液，测定微乳稳定性参数(Ke)值为4.0%，稳定性远高于甘油、1，2－丙二醇、无水乙醇作助乳化剂，在增加药物溶解度的基础上提高了药物稳定性，避免了临床给药时药物析出沉淀。PEG因特有的水溶性、无毒性、免疫学惰性和分子大小可改变性等特点，现已成为应用最广泛的长循环修饰材料，PEG可修饰小分子药物，现以抗肿瘤药物为主，如紫杉醇、喜树碱、18β－甘草次酸(18β－GA)等。PEG广泛于中药药用辅料，同时也具有隐含的不良影响，小分子药物经修饰后，能显著改善或提高难溶药物的水溶性、提高其生物活性。然而，载体在PEG化修饰后，其在体内的药代动力学行为不可预测的变化可能发生;PEG的不可生物降解性和有氧环境中易降解性可能会产生不利影响，注射用PEG作溶剂有不同程度的溶血作用。PEG修饰药物的新技术已进入实际应用阶段，其新型药物传递系统正逐步应用于药物的开发与研制中，是使用极为广泛的药用辅料。
结果显示同浓度的PEG400做为溶剂其溶液在脂肪乳中的分散稳定性好，初步拟定PEG400作为溶媒；以PEG400溶液在脂肪乳中的分散稳定性为指标，筛选pH值调节剂枸橼酸用量，确定pH为3-5时溶液稳定性最好。
2.PEG400溶液制备工艺考察
通过对处方的筛选以及溶解温度、温度耐受性、活性炭吸附试验、灭菌条件等工艺进行考察，确定了最佳的处方和制备工艺。本研究工艺过程为首先取适量的PEG溶液加热至50±5℃，将配方量的紫杉醇原料和无水枸橼酸加入后混匀溶解，加入活性炭进行吸附，去除样品溶液中内毒素，脱碳处理后进行除菌过滤，最终成为无菌紫杉醇注射液，临用时用注射用20%中/长链脂肪乳作稀释剂配制而成的一种新的给药系统，增加紫杉醇的溶解度达到临床用药的有效浓度，不仅避免了使用蓖麻油的毒副作用，而且同时补充了患者的营养。该给药系统，不含任何表面活性剂，通过加入无水柠檬酸作为稳定剂，制备工艺简单、质量可控、成本低廉。
3.紫杉醇注射液质量标准建立和方法的验证
对制得的紫杉醇注射液进行了详细的质量研究，根据中国药典2015年版(通则0102)对注射液的要求，依据产品特性参考市售紫杉醇注射液质量标准，本论文建立了脂肪乳稀释型紫杉醇注射剂的质量标准。检测项目包括：(1)建立了紫杉醇注射液的含量测定方法并进行了方法学验证。(2)建立了有关物质测定方法并进行了方法验证。通过对USP40与Ch.P(2015年版)有关物质方法比较及对流动相比例的调整，确定了最佳检测条件。(3)分别采用薄膜过滤法、凝胶法进行了无菌检查和内毒素检查；以有关物质含量变化为指标，比较不同pH值样品稳定性的影响，并分别对水分、渗透压、不溶性微粒对有关物质的影响进行了研究。
按照建立的脂肪乳稀释型紫杉醇注射剂的质量标准，我们对三批自制产品进行全检，对紫杉醇注射液进行高温(60℃)30天影响因素试验，40℃加速试验6个月，25℃长期试验9个月，考察其性状、pH值、水分、不溶性微粒、可见异物、含量、细菌内毒素等指标，结果表明各项检测指标均符合规定。
20%中/长链脂肪乳注射液是临床常用的静脉营养补充剂，可提供人体营养所需的能量和必需脂肪酸，具有如下优点：应用历史悠久、应用广泛、安全性高、生产厂家多(国内有10余家中/长链脂肪乳注射液生产厂家，如广州百特侨光医疗用品有限公司、华瑞制药有限公司、贝朗医疗(苏州)有限公司、辰欣药业股份有限公司等，临床应用广泛，货源充足，易于购得)。故本研究的乳剂稀释用紫杉醇注射液，选用中/长链脂肪乳注射液作为稀释剂。
4.乳剂稀释用紫杉醇注射液药代动力学研究
考察不同乳剂稀释用紫杉醇注射液在SD大鼠体内药代动力学，不同厂家(华瑞药业、贝朗药业、鲁抗药业、百特侨光药业)生产的脂肪乳制备的紫杉醇乳剂在SD大鼠体内的药代动力学过程基本一致，从不同时间点紫杉醇的血药浓度动态变化的平均AUC的比值结果(处于0.8～1.2范围内)，从一定程度上说明不同厂家生产的脂肪乳制备的紫杉醇乳剂对紫杉醇SD大鼠体内的药代动力学特征没有明显影响。
综上所述，本研究制备一种新型的脂肪乳剂稀释型的紫杉醇注射液，该制剂包括药物、PEG400溶液和空白脂肪乳剂，是一种新型的、安全的、不含聚氧乙烯蓖麻油的乳剂稀释用紫杉醇注射液，该制剂是将紫杉醇溶解在注射用溶媒聚乙二醇400中，并添加适量的无水枸橼酸制备而成的紫杉醇溶液，不含任何表面活性剂，临用时，只需将该溶液注入临床上广泛用于营养补充剂的20%中/长链脂肪乳注射液中，摇匀，即可静脉滴注。本研究利用了脂肪乳剂的乳微粒吸附特性以及相似相溶原理，临用时将紫杉醇转载在乳微粒上，形成较稳定的乳剂分散液，为解决难溶性药物和其传统制剂所存在的弊端，扩大纳米载体可包裹药物的范围，解决传统载药脂肪乳剂的稳定性差和网状内皮系统吞噬的问题提供了依据。同时对于包装材料、输液器都无特殊要求，使用更方便，还能补充患者的营养，改善了过敏反应带来的临床风险和依从性，临床用药更安全、简便。