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[目的]检测乙肝核心抗体阳性供肝组织内HBV cccDNA,结合肝移植术后乙肝复发率,探讨HBcAb阳性供肝中cccDNA与术后HBV复发的关系。[方法]实验分为两部分。第一部分：建立检测供肝组织中HBV cccDNA的荧光定量PCR检测体系。根据入组病例的种族和地理分布特点,在GenBank选取HBV常见B、C基因型50株的全基因组序列,结合HBV rcDNA、HBV cccDNA结构特点选择相对保守的序列设计HBV cccDNA选择性引物和探针。根据cccDNA的结构和生物学特点,利用PSAD消化去除rcDNA和整合型HBV DNA的干扰后,利用跨越缺口的选择性引物扩增,延长到探针结合位点时,利用其外切酶活性将探针切断,产生荧光信号。以pCP10质粒构建标准曲线,β-actin作为内参照,对供肝组织提取的DNA样本进行PSAD消化后进行cccDNA检测,确定引物的最佳退火温度和检测灵敏度。第二部分：HBcAb阳性供肝组织内HBV cccDNA的荧光定量PCR检测与术后HBV的复发率的关系。2007年1月至2010年1月因乙肝相关性疾病在我院行肝移植手术患者1200例,根据实验分组、入选标准、排除标准,选取病例共85例,其中男性65例,女性20例,年龄18-65岁,平均为44.55±12.37岁,随访18-60个月,平均随访32.12±10.06个月。分为实验组(HBcAb阳性供肝、HBsAg阴性,n=40)、对照组(HBsAg阳性供肝,n=15)、正常组(无肝炎供肝,n=30)三组。入选标准：1)年龄18-65岁,性别不限；2)HBsAg或HBsAg和DNA阳性；3)签署知情同意；4)预计术后存活6个月以上者。排除标准：1)术前血清学HBsAg阴性；2)预计术后生存期<6个月者；3)存在其它肝炎病毒混合感染；4)HBV病毒变异者；5)严重药物过敏者。利用第一部分创建的方法,检测供肝组织内的HBV cccDNA.所有患者肝移植术后给予HBIG联合核苷类药物预防乙肝复发方案。定期检测HBV血清学及HBV DNA,如有HBsAg阳性或HBV-DNA阳性者取肝穿活检病理确认复发。计算乙肝复发率,探讨HBcAb阳性供肝中cccDNA与术后HBV复发的关系。实验结果采用SPSS16.0统计软件对数据进行x2检验。p<0.05为差异有统计学意义。[结果]第一部分：成功建立了检测供肝组织中HBV cccDNA的荧光定量PCR检测体系。第二部分：入组患者共85例,实验组、对照组及正常组分别有12例、11例和0例cccDNA检测呈阳性,其阳性率分别为30%(12/40)、73.3%(11/15)、O。实验组与对照组的HBVcccDNA阳性率的差异有统计学意义(x2=8.419P=0.004)。实验组、对照组及正常组术后HBV的复发率分别为10%(4/40)、80%(12/15)和3.3%(1/30)。实验组与对照组术后HBV的复发之间差异有统计学意义(x2=25.913P<0.001)。实验组、正常组术后HBV的复发之间差异无统计学意义(x2=1.149P=0.284)。实验组cccDNA(+)与cccDNA(-)的供肝术后HBV的复发率分别为7.5%(3/40)、2.5%(1/40),术后HBV复发之间差异有统计学意义(x2=4.286P=0.038)。[结论]1、成功建立了检测供肝组织中HBV cccDNA的MGB探针荧光定量PCR方法,可用于石蜡组织中供肝内HBV cccDNA的检测。2、HBcAb阳性供肝中cccDNA可能是术后HBV复发的危险因素之一。