MiRNA-34a在宫颈癌组织中的表达及调控

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目的:通过分析比较CINIII和宫颈癌组织与正常宫颈组织中的miR-34a、P53及CDK4(细胞周期相关蛋白依赖性激素酶4)表达水平的差异,从而探讨宫颈癌发生的分子机制,探索宫颈癌早期诊断的指标以及寻找宫颈癌治疗新靶点。方法:收集新鲜正常宫颈组织、CINIII及宫颈癌组织标本(均来自于南昌大学第一附属医院妇科就治的、经临床病理检查诊断,入院后进行手术治疗,取标本前未接受化学治疗、放射治疗及免疫治疗的患者)。标本分为三组:CINIII为第一组;宫颈癌行根治性全子宫切除术及盆腔淋巴结切除术为第二组;对照组为因子宫肌瘤行子宫全切术的正常宫颈组织。取样后立即将组织冻存于-80℃超低温冰箱。采用免疫组织化学方法测CINIII及宫颈癌组织及正常宫颈组织中P53的蛋白表达水平,并运用Step-loop实时定量PCR检测组织中miR-34a的表达水平,Western blot技术检测miR-34a靶定的CDK4的表达。结果:1.用免疫组织化学方法测CINIII及宫颈癌组织及正常宫颈组织中P53的蛋白表达水平提示P53蛋白在正常宫颈组织、CINIII组织、宫颈癌组织中阳性率逐渐升高。P53在正常宫颈组织中的阳性率为0%(0/18),在CINIII及宫颈癌组织中阳性率分别为35%(7/20),68%(34/50)。CINIII和宫颈癌组P53蛋白的阳性率明显高于正常宫颈组织,差异具有显著性(P<0.01)。同时宫颈癌P53蛋白阳性率也明显高于CINIII组,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.用Step-loop实时定量PCR检测组织中miR-34a的表达水平。CINIII和宫颈癌组织中miR-34a相对表达水平明显低于对照组正常宫颈组织,分别约为对照组的0.53±0.13倍和0.11±0.07倍,差异具有统计学意义(P<0.01)。同时宫颈癌组与CINIII组miR-34a相对表达量的差异也具有显著性(P<0.01)。3.用Western blot技术检测miR-34a靶定的CDK4的表达提示随着宫颈病变程度的增加,CDK4的表达逐渐上升。CDK4/β-actin灰度比值在正常宫颈组织、CINIII及宫颈癌组织中分别为0.18±0.01,0.31±0.02,0.64±0.04。CINIII和宫颈癌组织中CDK4表达水平明显高于对照组正常宫颈组织,差异具有显著性(P<0.01)。同时宫颈癌组与CINIII组CDK4表达水平的差异也具有显著性(P<0.01)。结论:本研究结果表明随着宫颈组织病变进展,P53蛋白的阳性率逐渐上升,miR-34a表达下调,而CDK4蛋白的表达上调,表明三者均参与宫颈癌的形成及恶化过程。
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