黄芩苷的生物转化及其产物的抗病毒作用

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本文利用米曲霉对黄芩苷进行了生物转化,使黄芩苷转化为其苷元黄芩素,并对黄芩苷的生物转化培养基进行了碳源与氮源的优化,以提高黄芩苷的转化率。同时还从转化培养基中对转化产物黄芩素进行了提取、纯化并鉴定,进一步研究了黄芩素的抑制副溶血弧菌噬菌体与凡纳滨对虾WSSV作用。主要实验工作及结果如下:1、利用米曲霉的两步活化法将黄芩苷转化为黄芩素,并对转化产物进行了提纯与鉴定。转化条件为:液体发酵,pH6,30℃,利用综合马铃薯培养基与玉米芯培养基两步发酵。所得的玉米芯发酵液加甲醇混匀后过滤,通过高效液相色谱检测,结果表明米曲霉已经将黄芩苷转化为黄芩素。同时用乙醚萃取法从玉米芯发酵液中萃取到黄色固体提取物,经过高效液相色谱与标准品对照鉴定,该提取物为黄芩素。2、通过对黄芩苷的转化培养基的碳源与氮源优化,使黄芩苷的转化率由1.09%提高至88.36%,并确定了黄芩苷的生物转化培养基的最适配方为:0.0017%精氨酸+0.0017%缬氨酸+0.0017%谷氨酸+0.0017%丙氨酸+0.0017%组氨酸+0.0017%酪氨酸+0.01%尿素,0.4%KH2PO4,0.04%CACl2,0.04%MGSO4,pH6。3、利用转化产物黄芩素进行抑制副溶血弧菌噬菌体裂解作用的研究,并比较了黄芩素悬浊液与黄芩素环糊精包合物的副溶血弧菌噬菌体裂解作用的抑制效果。结果表明,黄芩素悬浊液及黄芩素环糊精包合物的抑制副溶血弧菌噬菌体裂解作用效果的强弱与其浓度、作用时间呈正相关,黄芩素环糊精包合物的抑制副溶血弧菌噬菌体裂解作用比黄芩素悬浊液稍强。4、以凡纳滨对虾为研究对象,研究了黄芩素环糊精注射液对WSSV的抑制作用。通过死亡率以及NOS、PO、血蓝蛋白、虾青素、血细胞计数等免疫学指标的变化来检测黄芩素对凡纳滨对虾WSSV的抑制效果。结果表明,黄芩素使感染WSSV凡纳滨对虾的死亡率由100%降低至5%,并且在NOS、PO、血蓝蛋白、虾青素、血细胞数量上表现出一定的差异性,注射过黄芩素的药物组与未注射过黄芩素的感染组的凡纳滨对虾不仅各免疫因子的变化趋势不同,而且各免疫因子的变化幅度也不同,前者的变化幅度均小于后者,这说明,黄芩素对WSSV起到了一定的抑制作用,从而使得凡纳滨对虾体内所诱导产生的各种免疫因子较少。
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