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霍山石斛(Dendrobium huoshanense)俗称米斛,是一种名贵的药食同源珍稀植物,具有益胃生津,滋阴清热等功效,极具开发利用价值。目前,有关霍山石斛的研究主要集中在多糖等生物大分子上,而对小分子化合物的研究则相对较少。基于上述现状,本文对霍山石斛茎中小分子化合物进行提取、分离、纯化及结构鉴定,并利用脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型对其进行体外抗炎活性及作用机制研究,以期阐明霍山石斛茎的抗炎功效物质基础,为进一步利用霍山石斛提供科学依据,为开发霍山石斛功能性食品和特色产品提供理论指导。本论文的研究内容及结果主要有如下几个方面:(1)霍山石斛茎抗炎活性部位筛选。采用95%乙醇对霍山石斛茎干粉进行冷浸提取,提取物经浓缩后用D101大孔吸附树脂进行抗炎活性成分富集,依次用水、30%、50%、70%、95%乙醇进行梯度洗脱,对应获得HA、HB、HC、HD、HE等5个不同极性部位,经LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型的筛选,确定HC和HD为霍山石斛茎抗炎活性部位,其中以HD抗炎活性最佳。(2)霍山石斛茎抗炎活性部位单体化合物分离纯化及结构鉴定。利用硅胶色谱柱、MCI色谱柱、ODS色谱柱、凝胶色谱柱、pre-HPLC等分离手段,从霍山石斛茎中共分离得到14个单体化合物。利用核磁、质谱等现代波谱学技术对单体化合物进行结构鉴定,结果显示化合物1(3-hydroxy-5-methoxybibenzyl)、化合物2(3-hydroxy-5,4’-dimethoxybibenzyl)、化合物3(dendrocandin U)、化合物4(den drocandin B)、化合物5(3,3′-dihydroxy-5-methoxybibenzyl)、化合物6(batatasin III)、化合物7(3,4′-dihydroxy-5-methoxybibenzyl)为联苄类化合物,化合物8(dihydroconiferyl dihydro-p-coumarate)、化合物9(syringaresinol)、化合物10(ethyl 3-(4-hydroxyphenyl)propanoate)为苯丙素类化合物,化合物11((R)-1-(3-ethyl phenyl)ethane-1,2-diol)、化合物12(4-hydroxybenzaldehyde)、化合物13(2(5H)-furanone,5-hydroxy-3,4-dimethyl-5-pentyl)、化合物14((+)-Loliolide)为其他类化合物。(3)单体化合物体外抗炎活性筛选。LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型的NO抑制活性评价发现,14个单体化合物中的化合物1、2、3、5、6、7能显著抑制NO的产生,RT-PCR分析表明化合物1、2、3、5、6、7均能显著抑制细胞炎症因子iNOS、TNF-α、IL-1βmRNA的表达,这些结果证明化合物1、2、3、5、6、7具有显著的抗炎活性,且可能是霍山石斛茎发挥抗炎作用的物质基础。(4)霍山石斛茎抗炎活性成分作用机制研究。NF-κB、MAPK及Akt炎症通路蛋白的Western-Blot分析表明,化合物3和5可有效抑制LPS诱导的IκB、p65、p38、ERK、JNK、Akt的磷酸化,抑制NF-κB、MAPK及Akt通路的活化,从而抑制巨噬细胞炎性介质的表达与分泌,发挥抗炎作用。