山茱萸的敞开式质谱快速分析研究

来源 :湖南师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:liongliong470
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中医药作为中华民族的文化遗产瑰宝,集实践经验、临床疗效和完整理论体系于一身,拥有深厚的社会基础与文化底蕴,在世界范围内越来越受欢迎。然而药材市场中的部分药材存在伪品和混伪情况,因此中药的质量控制和品种鉴别对保证中药的疗效和安全使用尤为重要。敞开式质谱技术自开发以来,因其简单快速、实时、高灵敏度、高通量等特点,发展迅速,已开发出30余种新型离子化技术,成为生物、医药、食品等多个领域的强有力分析手段。本文首次结合敞开式质谱的优势,开展了山茱萸中药材的质量控制、品种鉴别及生物活性快速分析研究,包括其定性、定量和生物活性筛选研究。论文内容如下:第一章综述了山茱萸的研究概况,包括其化学成分、药理作用、品种鉴别和质量控制现状,同时介绍了敞开式质谱的研究现状,尤其是本文所采用的实验手段—纸喷雾质谱技术的原理及应用研究现状,最后提到了乙酰胆碱酯酶的活性检测及山茱萸对其的活性抑制情况。第二章是奠基章节,采用传统成熟的液相色谱(HPLC)方法对市售生品山茱萸进行指纹图谱分析并利用化学计量学加以品种鉴别,为第三章中敞开式质谱研究山茱萸奠定了物质基础;利用液相色谱质谱联用(HPLC-MS)方法完成山茱萸中14种化学成分的定性分析,结合电喷雾电离(ESI)-MS质谱轮廓进一步为第三章中敞开式质谱研究山茱萸奠定了理论基础。第三章采用纸喷雾质谱(PS-MS)技术研究了山茱萸的敞开式质谱化学轮廓,并实现了敞开式质谱对山茱萸的快速品种鉴别和质量控制分析。首先优化了PS-MS实验条件,并以山茱萸标准对照药材为模型构建了山茱萸敞开式质谱化学轮廓方法。基于前一章中山茱萸的成分分析结果对山茱萸质谱化学轮廓中活性成分进行峰指认。随后利用化学计量学方法对23批山茱萸和10批伪品山楂药材的质谱轮廓进行品种鉴别,正/负离子模式下山茱萸与山楂均明显分为两类。最后利用京尼平作为内标,对山茱萸效标成分马钱苷和莫诺苷进行半定量分析。第四章建立了乙酰胆碱酯酶PS-MS快速监测方法用于山茱萸生物活性的筛选。优化了反应液与甲醇稀释比例、缓冲溶液、纸基、锥孔电压和喷雾电压,并以HPLC-MS作为对比方法对PS-MS方法进行验证。结果表明,两种方法线性相关系数均为0.9999,精密度均4%、回收率在99.98%-100.38%。最终该方法成功应用于人血浆中乙酰胆碱酯酶活性测定以及山茱萸生物活性的快速筛查。该方法专属性高、基质效应小、快速、高通量,可为其他酶的敞开式质谱快速监测提供参考,也充分证明了对中药生物活性筛选的重要性。
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