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目的:利用小鼠肝损伤模型研究ATF4在肝损伤中的作用。方法:通过饲养C57BL/6小鼠,选取6-8周龄(20-22 g)健康的雄性小鼠,采用蛋白免疫印迹(Western blot)和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测分析小鼠肝脏、心脏、肾脏、肺脏中ATF4的蛋白和mRNA表达水平情况;行腹腔注射衣霉素(Tun)处理小鼠后,采用RT-PCR检测分析肝组织内质网应激活化标志性分子XBP1的活化剪切情况。此外,采用Western blot检测分析Tun对肝脏和肺脏组织中内质网应激分子eIF2α的磷酸化、Bip、ATF4蛋白水平的影响。腹腔注射LPS/D-GalN和CCl4处理小鼠建立急性和慢性肝损伤模型,采用Western blot和RT-PCR检测分析小鼠肝脏组织ATF4的蛋白和mRNA表达水平的影响。尾静脉注射crisper/cas9-ATF4质粒(ATF4-cri质粒)处理小鼠构建肝ATF4短期敲低小鼠模型,再腹腔注射LPS/D-GalN和CCl4处理小鼠,采用Western blot和RT-PCR检测分析小鼠肝脏组织ATF4的蛋白和mRNA表达水平及血清转氨酶(AST、ALT)的水平情况。结果:1.ATF4蛋白在小鼠肝脏组织中高表达:Western blot结果表明小鼠肝脏组织中ATF4蛋白表达量与其它各重要脏器组织相比很高。此外,RT-PCR结果显示在小鼠肝、心、肾、肺组织之间中ATF4的mRNA表达水平没有明显差异。结果提示小鼠肝脏组织中ATF4蛋白高表达。2.小鼠肝脏组织中ATF4蛋白的高表达不依赖于eIF2α通路:Western blot结果表明在肝、心、肾、肺组织中eIF2α均未见明显活化,且相互之间没有明显变化。结果提示小鼠肝脏组织中ATF4蛋白的高表达不依赖于eIF2α通路。3.小鼠肝脏组织中ATF4蛋白的高表达不依赖于内质网应激:RT-PCR结果表明Tun诱导了内质网应激活化标志性分子XBP1的活化剪切。这提示Tun诱导了小鼠肝脏组织内质网应激活化。与此同时,Western blot结果表明Tun处理小鼠后肝脏组织eIF2α磷酸化、Bip的表达上调,ATF4的表达却出现下调。此外,Tun处理小鼠后肺脏组织中内质网应激分子eIF2α磷酸化、Bip、ATF4的表达均明显上调。这些结果提示小鼠肝脏组织中ATF4蛋白的高表达不依赖于内质网应激。4.ATF4蛋白在LPS/D-GalN诱导的小鼠急性肝损伤中下调:Western blot结果表明在LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤模型中ATF4蛋白较对照组肝组织中也是明显下调;RT-PCR结果表明LPS/D-GalN对小鼠肝组织ATF4的mRNA没有影响。5.ATF4蛋白在CCl4诱导的小鼠慢性肝损伤中下调:Western blot结果表明在CCl4诱导的慢性肝损伤模型中ATF4蛋白较对照组肝组织中明显下调;RT-PCR结果表明CCl4对小鼠肝组织ATF4的mRNA没有影响。6.短期敲低肝ATF4小鼠模型的成功建立:实时荧光定量和PCR结果表明尾静脉注射ATF4-cri质粒处理小鼠后的肝组织较对照组肝组织中ATF4的mRNA明显下调(P<0.05)。此外,Western blot结果表明尾静脉注射ATF4-cri质粒处理小鼠明显下调了肝组织中ATF4蛋白的表达。这些结果提示尾静脉注射ATF4-cri质粒处理小鼠后,成功构建短期敲低肝ATF4小鼠模型。7.敲低ATF4加重了LPS/D-GalN和CCl4诱导的肝损伤:血清学转氨酶(AST、ALT)结果表明抑制小鼠肝组织中ATF4的表达会加重LPS/D-GalN和CCl4诱导的肝损伤。这提示ATF4蛋白保护了肝损伤。结论:ATF4蛋白在小鼠肝组织中高表达;ATF4的高表达不依赖于eIF2α和内质网应激;化学性肝损伤导致肝脏ATF4蛋白明显下调;ATF4在肝损伤中起保护作用。