【摘 要】
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目的:本实验通过使用差相富集联合免疫荧光原位杂交计数（subtraction enrichment and immunostaining-fluorescence in situ hybridization,SE-iFISH）检测晚期乳腺癌患者外周血中的循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTC）数量及RT-q PCR检测相关表型标志物的mRNA表达情况,分析CTC及其表
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目的:本实验通过使用差相富集联合免疫荧光原位杂交计数（subtraction enrichment and immunostaining-fluorescence in situ hybridization,SE-iFISH）检测晚期乳腺癌患者外周血中的循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTC）数量及RT-q PCR检测相关表型标志物的mRNA表达情况,分析CTC及其表型标志物与晚期乳腺癌患者临床特征、治疗疗效的相关性。方法:收集2018年6月-2020年1月由乳腺外科收治的经病理学诊断确诊为晚期乳腺癌的患者共43例,每次分别在患者治疗前以及经过2-3个治疗周期结束后采集外周血标本7.5ml/管,共两管。并据实体瘤疗效评价1.1标准（Response Evaluation Criteria in solid tumors,RECIST）进行疗效评估。其中一管7.5ml血液通过差相富集法富集到CTC后利用荧光原位杂交技术进行染色,最终在荧光显微镜下进行结果判读,计数患者CTC数量。另一管7.5ml外周血同样进行差相富集法富集CTC后提取总RNA,并通过RT-q PCR法检测波形蛋白（Vimentin）及蛋白激酶B（protein kinase B,AKT1）mRNA的表达情况。实验所得数据使用SPSS20.0统计软件进行数据分析,Graph Pad Prism 7.0软件进行数据的作图。结果:（1）利用SE-iFISH法检测晚期乳腺癌患者CTC的阳性率为86.05%（37/43）,显著高于健康对照组的6.67%（1/15）,差异有统计学意义（P0.05）。而治疗后呈CTC阳性的患者治疗有效率为36.84%,CTC阴性患者的治疗有效率为78.95%,两者差异具有统计学意义（P0.05）,且治疗后Vimentin表达量下降患者有更高的治疗有效率（P0.05）。结论:（1）通过SE-iFISH法检测晚期乳腺癌患者CTC具有较高的灵敏度,且相比于常用乳腺癌肿瘤标志物CEA、CA125、CA15-3有更高的诊断效率。（2）晚期乳腺癌治疗后CTC阴性患者相比治疗后CTC阳性患者的治疗有效率更高,差异具有统计学意义。（3）晚期乳腺癌患者治疗后CTC的阳性率相比治疗前显著降低,且治疗后CTC数量下降与更高的治疗有效率相关,治疗前后CTC的变化在一定程度上可用于评估治疗的疗效。（4）晚期乳腺癌组治疗前Vimentin及AKT1 mRNA表达量均显著高于健康对照组,且AKT1 mRNA表达量与晚期乳腺患者的临床分期、ER状态、PR状态存在相关性,Vimentin mRNA表达量仅发现与患者的PR状态存在相关性。（5）晚期乳腺癌患者治疗后Vimentin和AKT1 mRNA表达量均显著降低,且治疗后Vimentin表达量降低与更高的治疗疗效之间有关。提示治疗前后Vimentin的变化在一定程度上可用于评估治疗的疗效。
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