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研究背景：阿尔兹海默病(Alzheimers Disease,AD)是老年人最常见的痴呆类型,严重危害老年人健康,但发病机制未明。AD的主要病理特征是p.淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)在脑内聚集为老年斑(senile plaques,SPs),对占AD绝大部分的散发性AD(sporadic Alzheimer disease,SAD)的病因学研究发现,Aβ清除减少是其脑内Aβ聚集的主要原因。血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)是大脑清除Aβ的重要途径,存在于BBB上的晚期糖基化终产物受体(receptor for advancedglycation end products,RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LDL receptor relatedprotein-1,LRP-1)是一对作用方向相反的使Aβ穿梭于血脑之间的转运体,即大脑对Aβ清除能力取决于两转运体运载Aβ量的代数和。大量研究表明脑缺血,尤其是老年人普遍存在的脑慢性低灌注与散发性AD强烈关联,可以导致Aβ增加,但具体机制仍不清楚。Egb761是中医传统的脑缺血保护剂是常用的缺血脑保护中药,目前常被用作治疗AD。因此研究慢性脑缺血对BBB上RAGE、LRP-1表达的影响对于明确Aβ增加的机制以及进一步探讨AD的病因有重要的意义。
目的：1.探讨慢性缺血对BBB上RAGE、LRP-1表达的影响。2.通过研究Egb761对慢性缺血BBB上RAGE,LRP-1的影响探讨Egb761治疗痴呆的可能机制。
方法：将脑微血管内皮细胞系bEnd.3予低氧低糖或/和Egb761(100ug/ml)干预24h、36h、48h,MTT法检测低氧低糖或/和Egb761对脑微血管内皮细胞活力的影响,RT-PCR测定RAGE、LRP-1mRNA的表达,Western blot检测RAGE,LRP-1蛋白表达。
结果：1.Egb761对慢性低氧低糖培养bEnd.3细胞活力的影响:MTT的结果表明低氧低糖培养24h、36h、48h组较正常培养对照组细胞活力降低,具有显著性差异(P<0.05),Egb761对低氧低糖培养bend.3细胞具有保护作用。2.Egb761对慢性低氧低糖培养bEnd.3细胞RAGE、LRP-1mRNA水平表达的影响：低氧低糖培养24h、36h、48h后,bEnd.3细胞RAGEmRNA表达高于正常培养对照组,分别为正常培养对照组的1.56、1.62和1.98倍(P<0.05),低氧低糖培养36h、48h后,bEnd.3细胞LRP-1mRNA表达下调,分别为正常培养对照组的0.78和0.6倍(P<0.05)。而Egb761干预低氧低糖培养组与低氧低糖培养组相比,三个时段bEnd.3细胞RAGEmRNA表达均降低,具有统计学意义(P<0.05),而LRP-1mRNA表达与低氧低糖培养组相比无统计学意义(P>0.05)。3.Egb761对慢性低氧低糖培养bEnd.3细胞RAGE、LRP-1蛋白水平表达的影响：低氧低糖培养24h、36h、48h后RAGE蛋白表达呈时间依赖性增加(P<0.05),48h组升为正常培养对照组的1.7倍,三时间点LRP-1蛋白的表达呈时间依赖性降低,48h组低至正常培养对照组的20％(P<0.05),而Egb761干预低氧低糖培养组与低氧低糖培养组相比,三个时段bEnd.3细胞RAGE蛋白表达均降低,而24h、36h LRP-1蛋白表达增加,具有统计学意义(P<0.05)。
结论：1.慢性低氧低糖培养降低bEnd.3细胞活力,而Egb761对慢性低氧低糖培养bend.3细胞有保护作用。2.慢性低氧低糖培养增加bEnd.3细胞RAGEmRNA及蛋白表达,降低LRP-1mRNA及蛋白表达,可能因此增加Aβ自血液向脑内的转运,减少向脑外的清除,导致脑内Aβ水平增加。3.Egb761可逆转慢性低氧低糖状态下RAGE、LRP-1的表达,可能有利于Ap清除出脑,从而发挥脑保护作用。