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第一部分：调节性T细胞促进急性肝损伤修复目的：观察Tregs (regulatory T cells,调节性T细胞)在急性肝损伤过程中的动态变化,以及其在急性肝损伤修复中的作用。方法：急性肝损伤模型采用腹腔注射TAA (Thioacetamide,硫代乙酰胺)4Omg/Kg体重诱导。用Foxp3gfg转基因小鼠,观察给药后不同时期肝,血、脾组织中Foxp3的比率、及数量变化。分析给药前后Tregs亚群的变化,封闭Tregs功能,观察其在急性肝损修复中的作用。结果：伴随急性肝损伤病程进展,肝内Tregs出现凋亡,数量减少。在急性肝损修复期,肝内Tregs数量逐渐回升,于给药后72小时恢复到基线水平。分析给药前后Tregs亚群变化发现,在恢复期Tregs的数量回升主要是由于iTregs(induced regulatory T cells,诱导型调节性T细胞)的增多。封闭Tregs的功能,妨碍急性肝损伤的修复。结论：急性肝损伤修复期,肝内增多的iTregs促进急性肝损伤修复第二部分：肝星状细胞对调节性T细胞的诱导作用及机制目的:HSCs(hepatic stellate cells,观察肝星状细胞)是否可以诱导Tregs(regulatory T cells,调节性T细胞)生成,及其作用机制。方法：急性肝损伤模型采用腹腔注射TAA (thioacetamide,硫代乙酰胺)40mg/Kg体重诱导。用MMP9-/-及MMP13-/-小鼠,观察MMPs (matrix metalloproteases,金属蛋白酶)在Tregs诱导中的作用,以及对急性肝损伤修复的影响。采用3D胶培养小鼠HSCs,探索HSCs诱导Tregs的方法及机制。结果：MMP9-/-及MMP13-/-小鼠急性肝损伤修复期肝内Tregs回升障碍,肝损伤修复受阻。普通塑料平板共培养HSCs与naive T细胞,不能诱导出TregS。而采用3D胶培养HSCs可以诱导出Tregs,这些Tregs具有体外免疫抑制功能。此外,HSCs3D胶培基上清还可以稳定nTregs(natural Tregs,天然型调节性T细胞)的表型,对抗在IL-6(interluekin-6,白介素-6)作用下向Th17的分化。结论：HSCs被激活后分泌的MMPs,可以促进TGFβ活化,诱导Tregs产生,促进肝损伤恢复。HSCs激活后释放的维甲酸还可以维持nTregs的功能稳定。第三部分：调节性T细胞在肝纤维化中的作用及机制目的：探索Tregs(regulatory T cells,调节性T细胞)在纤维化肝脏中的作用,及其作用机制。方法：肝纤维化模型采用腹腔注射TAA(Thioacetamide,硫代乙酰胺)诱导。观察纤维化肝组织内Tregs数量变化。对比肝毒性药物在纤维化肝脏与正常肝脏内引起的炎症反应差异。采用PC61单克隆抗体封闭Tregs功能,观察Tregs对纤维化肝脏内炎症反应的影响。共培养Tregs与KCs(kupffer cells,枯否细胞),观察Tregs对KCs产生MMPs(Matrix Metalloproteases,金属蛋白酶)的影响。对比封闭Tregs或联合减灭KCs对肝纤维化溶解的影响。结果：纤维化肝组织内Tregs数量增多,炎症反应应答低下。封闭Tregs功能提高炎症反应应答强度,促进MMPs产生。若同时减灭KCs,MMPs的产生受到抑制。体外实验发现,Tregs可以抑制KCs产生MMP9。封闭Tregs可以促进纤维化肝脏纤维溶解,若同时减灭KCs,纤维溶解受到抑制。结论：纤维化肝组织内增多的Tregs抑制炎症反应,尤其可以抑制KCs产生MMPs,维持肝纤维化的存在。