丁香抑制低密度脂蛋白氧化和糖基化及其药效物质基础的研究

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动脉粥样硬化(AS)严重危害人类健康,是心血管疾病中最主要的致死原因之一,而低密度脂蛋白(LDL)氧化和糖基化修饰均是导致动脉粥样硬化(AS)的关键因素,因此寻找合适的方法抑制LDL氧化和糖基化修饰对防控AS具有重要意义。基于丁香抑制LDL氧化和糖基化有效成分的未知性以及荧光检测的高灵敏性,本研究以丁香的干燥花蕾为原料,分别构建LDL-CuSO4氧化和LDL-葡萄糖糖基化孵育体系,采用生物活性追踪法对丁香抗LDL氧化和糖基化进行研究,以明确其功能活性及对应的有效部位;进而采用高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF-MS/MS)技术对有效部位化学成分进行了检测和分析。主要结果如下:  1.LDL荧光特性变化的最佳测定时间为48h;5、10、15μg/mL丁香粗提物对LDL氧化修饰过程中色氨酸(Trp)荧光淬灭、荧光发色团红移、氧化产生的活性醛修饰apoB100所含赖氨酸(Lys)残基变化、荧光物质和脂褐素产生及三维荧光的变化均具有较好的抑制作用,且抑制作用与粗提物浓度正相关;10μg/mL正己烷相对Trp荧光淬灭、荧光发色团红移及三维荧光变化的抑制作用最强,而10μg/mL乙酸乙酯相抑制活性醛修饰Lys残基、荧光物质和脂褐素的产生效果最好。  2.50、100、200μg/mL丁香粗提物对LDL糖基化修饰过程中产生的早期产物(Amadori产物)、中期产物(二羰基化合物)及终末期产物(AGEs)均具有较好的抑制效果,且抑制效果与其浓度正相关;不同极性成分中乙酸乙酯相抑制LDL糖基化修饰能力最强,其中200μg/mL的丁香乙酸乙酯相能显著减少Amadori产物的产生;50、100μg/mL的乙酸乙酯相均能显著抑制二羰基化合物的生成,其抑制功效与浓度成正比;100、200μg/mL的乙酸乙酯相均能显著抑制AGEs的产生,其糖基化抑制率分别高达46.75%、61.45%。  3.依据质谱裂解规律及文献资料,在负离子模式下,从丁香乙酸乙酯相样品中共分析检测出12种化合物。它们分别为5-羟甲基糠醛、没食子酸、香草酸、2-O-(6-O-没食子酰基)-β-D-葡萄糖基苯甲酸甲酯、对-羟基-反式肉桂酸、对羟基苯乙酮、eugenol4-O-β-D-(6-O-galloyl)glucopyranoside、鼠李秦素-3-O-β-D-葡萄糖苷、阿魏醛、木犀草素、槲皮素和3,5,3,4-四羟基-7-甲氧基黄酮。  上述结果表明,丁香对LDL氧化修饰过程中荧光特性的变化具有较好的抑制作用,起抑制作用的主要物质集中在乙酸乙酯相和正己烷相;丁香对LDL糖基化修饰也具有较好的抑制作用,其药效物质基础集中在乙酸乙酯相;采用HPLC-Q-TOF-MS/MS技术可初步确定丁香乙酸乙酯相抗LDL氧化及糖基化有效成分。本文研究结果初步阐明了丁香抑制LDL氧化和糖基化的有效成分,为最终成功研发丁香抗AS功能食品提供实验依据。
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