新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的禽类一种急性高度接触性传染病。NDV毒力强弱与F蛋白裂解位点区112～117位的氨基酸序列的组成有关,弱毒株在该区的氨基酸序列为G-R/K-Q-G-R-L,强毒株在该区的氨基酸序列为R-R-Q-K/R-R-F。本试验是根据氨基酸密码子的简并性以及大肠杆菌对密码子的偏爱性对FO蛋白裂解位点区核苷酸序列进行优化,把编码国内外普遍流行的NDV强毒株FO蛋白裂解位点区GRRQRRF、GRRQKRF和国内外新发现的变异新城疫强毒株FO蛋白裂解位点区RRRQKRF、GRRKKRF的核苷酸用Linker(GGGGS)相互串联构建基因Fe(F protein multiple epitope),然后进行2倍拷贝和4倍拷贝,成功构建了强毒株新城疫8个裂解位点区核苷酸相串联的原核表达载体pET-28a(+)/2Fe和16个裂解位点区核苷酸相串联的原核表达载体pET-28a(+)/4Fe,2Fe和4Fe蛋白在大肠杆菌原核表达系统中得到有效表达,经Western blotting鉴定,2Fe和4Fe蛋白与NDV强毒株F48E9阳性血清发生特异性反应而与NDV弱毒株V4的阳性血清不反应,以2Fe、4Fe蛋白分别单独免疫兔制备多抗,以此多抗建立了对NDV强弱毒株进行鉴别诊断的ELISA方法。本研究结果为进一步建立全面、快速、准确的NDV强弱毒株鉴别诊断的ELISA方法提供新的思路。