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为了探究抗生素恩诺沙星对贝类肠道微生物多样性的可能影响,我们运用基于16S rDNA的高通量测序技术对马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)、企鹅珍珠贝(Pteriapenguin)和华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)的微生物群落在恩诺沙星处理下的变化情况进行了测定。(1)采用16S rDNA基因测序定量评价了不同浓度(0,5和10mg/1 ENR)恩诺沙星下马氏珠母贝肠道微生物群落的变化情况。检测到9门48属。在门水平上,对照组(PA0 mg/L)的优势菌门为变形菌门(Proteobacteria)、柔膜菌门(Tenericutes)和厚壁菌门(Firmicutes),相对丰度分别为40.65%、33.87%、15.75%,而两个恩诺沙星处理组(PB 5 mg/L,PC 10 mg/L)的优势菌均为柔膜菌门,相对丰度分别达到91.61%和85%。在属水平上,PA组的优势菌属为支原体属(Mycoplasma)、未分类属(Unclassified)、微小杆菌属(Exiguobacterium)、柠檬酸细菌属(Citrobacter)、埃希氏菌-志贺氏菌属(Escherichia-Shigella),相对丰度分别为26.33%、14.84%、12.22%、10.62%、9.66%。PB组的优势菌属为弧菌属(Vibrio),相对丰度为52.1%。PC组的优势菌属为弧菌属(Vibrio)和发光杆菌属(Photofbacterium),相对丰度分别为40.24%、23.43%。聚类热图分析和主成分分析表明,低浓度组和高浓度组有较高的相似性,并与对照组有明显的分离。恩诺沙星在5 mg/L以上即可显著改变马氏珠母贝的肠道微生物多样性。(2)应用Illlumina高通量测序技术对3个不同恩诺沙星浓度组(0 mg/L、5 mg/L、10 mg/L)共9个企鹅珍珠贝肠道样本中细菌进行16s rDNA基因文库构建,运用生物信息学手段在门与属水平上分析比较了各组间肠道微生物结构和多样性的差异。分析显示,9个样本中共检测到11个菌门,其中优势菌门是变形杆菌门、拟杆菌门、梭杆菌门、螺旋体门、蓝藻门、厚壁杆菌门;共检测到79个菌属,优势菌属主要包括弧菌属、发光杆菌属、Psychrilyofbacter、假交替单胞菌属、疏螺旋体属、交替单胞菌属、Nannochioropsis-oceanica、弓形杆菌属、Thalassotalea、Amphritea、Tenacibaculum、微小杆菌属等。不同恩诺沙星处理下,企鹅珍珠贝优势菌门与菌属种类丰度差别较大。恩诺沙星处理下,变形菌门相对丰度显著升高;拟杆菌门相对显著降低,10 mg/L处理组相对丰度最低。恩诺沙星10 mg/L处理组弧菌属丰度最高,显著性高于对照组与5 mg/L处理组。5 mg/L处理组发光杆菌属丰度显著高于对照组与10 mg/L处理组。Psychrilyobacter属经过恩诺沙星处理后丰度显著低于对照组。聚类热图分析和主成分分析(PCA)表明,对照组的微生物群落与其他两组明显分离。总的来说,低剂量5 mg/L的恩诺沙星显著改变了企鹅珍珠贝的群落多样性。(3)采用基于16S rDNA的高通量测序技术研究了不同剂量(0、5和10 mg/L ENR)的恩诺沙星对华贵栉孔扇贝肠道微生物群落的影响。共检出11门76属。在门水平上,随着恩诺沙星暴露剂量的增加,变形杆菌的相对丰度增加(从34.96%增加到77.31%)。柔膜菌门的优势地位被变形杆菌门所取代,柔膜菌门的比例下降到3.85%。在属水平上,支原体属相对丰度下降(从58.38%下降到3.85%),弧菌属的相对丰度从15.23%上升到40.8%,成为优势属。聚类热图分析和主成分分析(PCA)表明,大剂量组(10 mg/L)的微生物群落与其他两组明显分离。总的来说,高剂量10 mg/L的恩诺沙星显著改变了华贵栉孔扇贝的群落多样性。本研究揭示了恩诺沙星对以上经济贝类肠道微生物群落的影响规律。同时,这些结果也有利于我们深入了解贝类肠道微生态系统的结构,并有助于指导恩诺沙星在贝类细菌病治疗中的合理应用。