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目的:
转化生长因子β 1(Transforming Growth Factor-β 1,TGF-β 1)诱导的人胚肺成纤维细胞(Human Fetal Lung Fibroblast,HFL-F)向肌成纤维细胞(Myofibroblast,MF)转化被认为是肺间质纤维化病变中的关键步骤。通过研究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcystein,NAC)、白芍总甙(Total Glucosides of Peony,TGP)、沙利度胺(Thalidomide,THD)对TGF-β 1诱导HFL-F向MF转化过程和对已分化MF的作用,为进一步体内实验和临床治疗结缔组织病相关肺纤维化病变提供参考。
方法:
体外培养HFL-F,5 μ g/l TGF- β1诱导HFL-F向MF转化,通过测定羟脯氨酸含量(Hydroxyproline,HYP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)mRNA、Ⅲ型胶原(collagen Ⅲ,Col Ⅲ)mRNA和α-SMA蛋白,观察10μ g/l NAC、50 μ g/l TGP、50μ g/lTHD对HFL-F向MF转化过程以及己分化MF细胞的影响。
结果:
5μg/l TGF-β 1诱导HFL-F 96h后,羟脯氨酸含量增高(p<0.01),α-SMA mRNA(p<0.05)、Col Ⅲ mRNA表达上调(p<0.01),α-SMA蛋白表达量增加。
同时加入10 μ g/1 NAC可抑制羟脯氨酸含量增高(p<0.05),ColⅢ mRNA表达上调(p<0.01)和α-SMA蛋白表达量增加,但对于α-SMAmRNA表达上调没有影响(p>0.05)。50 μ g/l TGP可抑制羟脯氨酸含量增高(p<0.05)与α-SMA蛋白表达量增加,但对于α-SMA mRNA与ColⅢ mRNA的表达上调没有影响(p均>0.05)。50 μ g/l THD可抑制羟脯氨酸含量增高(p<0.05),Col Ⅲ mRNA表达上调(p<0.05)和α-SMA蛋白表达量增加,但对于α-SMA mRNA表达上调没有影响(p>0.05)。 5 μ g/l TGF-β 1刺激HFL-F 96h后,再加入10 μ g/l NAC或50μ g/l TGP对羟脯氨酸含量、α-SMA mRNA、Col Ⅲ mRNA表达与α-SMA蛋白表达量等方面均没有影响(p均>0.05)。再加入50 μ g/lTHD在羟脯氨酸含量、β-SMA mRNA表达与β-SMA蛋白表达量等方面均没有。明显影响(p均>0.05),但可抑制Col Ⅲ mRNA的表达(p<0.05)。
结论:
5μg/l1 TGF-β1可诱导HFL-F向MF转化。
10μg/1 NAC、50 μg/l TGP、50μg/l THD可部分抑制TGF-β 1诱导HFL-F向MF转化,抑制作用主要体现在蛋白水平,抑制MF标记蛋白α-SMA蛋白合成与胶原合成(羟脯氨酸的含量降低)。
对已分化的MF,10 μ g/l NAC与50 μ g/l TGP在RNA水平与蛋白水平对其均没有显著影响。50 μ gl THD可抑制ColⅢmRNA的表达,在蛋白水平则没有作用。