RNA干扰沉默JARID1B基因治疗套细胞淋巴瘤的实验研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:johnnyhljy
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目的:研究JARID1B蛋白、LSD1蛋白、组蛋白H3K9、H3K4甲基化在套细胞淋巴瘤中异常表达及其意义,寻找套细胞淋巴瘤分子治疗的新标靶;应用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1的JARID1B基因,了解干扰JARID1B对Jeko-1细胞增殖和凋亡的作用,以及对组蛋白甲基化、乙酰化的影响,探讨套细胞淋巴瘤基因治疗的新方法。方法:1、免疫组织化学方法检测JARID1B蛋白、LSD1蛋白、组蛋白H3K9、H3K4甲基化在套细胞淋巴瘤中的表达差异。2、设计JARID1B siRNA片段,经LipofectamineTM2000脂质体转染Jeko-1细胞后,RT-PCR检测JARID1B mRNA转录水平的变化。3、应用四唑盐(MTT)法绘制细胞生长曲线、流式细胞术分析细胞调亡。4、Western blot检测JARID1B siRNA作用后凋亡相关蛋白Bcl-2、procaspase-3、C-myc表达水平的变化,以及JARID1B蛋白表达的变化、组蛋白H3K4甲基化及H3、H4乙酰化状态变化。结果:1、与淋巴结反应性增生比较,套细胞淋巴瘤JARID1B蛋白、LSD1蛋白表达增加、组蛋白H3K4甲基化表达下降(p<0.01),有显著性差异,而组蛋白H3K9表达变化不明显。2、转染后JARID1B的mRNA表达明显减弱,且随着浓度的提高,干扰效率也逐渐上升。3、JARID1B siRNA能明显抑制Jeko-1细胞的增殖,作用24小时的半数抑制浓度(IC50)约为60nM,JARID1B siRNA抑制Jeko-1细胞生长周期,促进凋亡,且随着浓度增加及作用时间延长,作用加强。4、转染24小时后细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、procaspase-3及原癌基因C-myc的表达下降。5、JARID1B siRNA可引起Jeko-1细胞的JARID1B蛋白表达水平的降低,同时增加组蛋白H3K4甲基化及组蛋白H3的乙酰化,组蛋白H4的乙酰化水平无显著变化。结论:1、套细胞淋巴瘤中JARID1B蛋白、LSD1蛋白呈高表达,组蛋白H3K4呈低表达,而H3K9表达无明显改变,提示JARID1B蛋白、LSD1蛋白、组蛋白H3K4可能与套细胞淋巴瘤的发生有关。2、运用RNAi技术,可以有效地干扰Jeko-1细胞中JARID1B的表达,抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡。3、干扰JARID1B后可上调组蛋白甲基化H3K4,及组蛋白H3乙酰化。提示RNAi技术有望成为套细胞淋巴瘤靶向基因治疗的新工具,同时JARID1B基因也可能成为套细胞淋巴瘤靶向基因治疗的新靶点。
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