东亚飞蝗海藻糖酶基因的克隆与表达分析

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海藻糖是一种由两个葡萄糖分子组成的非还原性二糖,广泛存在于各种生物中,包括细菌、真菌、植物及已知所有种类的昆虫中,是昆虫血淋巴中主要的糖类(大约占80%~90%)和能量物质。海藻糖既是一种贮藏性糖类,又是应激代谢的重要产物,在干旱、脱水特别是冷冻、高温和氧化等不良条件下,对生物大分子有很好的保护作用。海藻糖酶可以特异性地将一分子海藻糖水解为两分子葡萄糖而被利用,鉴于海藻糖酶在生物有机体能量代谢过程中的重要作用,近年来许多生物化学家致力于研发基于海藻糖酶抑制剂的新型农药,试图通过阻断有机体内海藻糖的水解,来达到杀虫和抑菌的目的。海藻糖酶是海藻糖分解代谢过程中的一个关键酶。虽然有关昆虫海藻糖酶基因的研究已经比较多,大量编码海藻糖酶的cDNA序列也得到了克隆,但是东亚飞蝗作为一种世界性的农业害虫,目前尚无相关研究报道。本研究采用RT-PCR和RACE方法从东亚飞蝗(Locusta migratoria manilensi)中克隆了一个可溶性海藻糖酶基因(缩写名为LmTre)的全长cDNA序列(GenBank登录号:FJ795020),并分析了该基因在不同组织的表达特征。获得的cDNA全长1953bp,其中包括1686bp的开放阅读框,共编码561个氨基酸,预测的分子量和等电点分别为65579.82 Daltons和6.66,信号肽和跨膜分析显示此蛋白属于可溶性蛋白。该氨基酸序列和已经公布的其他昆虫的海藻糖酶氨基酸序列有较高的相似性(41~48%)。本研究通过半定量RT-PCR研究了LmTre的组织表达情况,分别取五龄幼虫的脂肪体、肠道、翅、血细胞和腿部肌肉进行实验。实验结果显示此海藻糖酶基因在东亚飞蝗脂肪体、肠道、翅、腿部肌肉中表达,而且此海藻糖酶基因趋于在能量代谢活跃的组织中高表达。
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