论文部分内容阅读
目的探讨类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、抗环瓜氨酸多肽抗体(anti-cyclic peptide containing citrulline,anti-CCP)、抗突变型瓜氨酸化波形蛋白抗体(anti-mutated citrullinatedvimentin,anti-MCV)在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)诊断中的作用和价值,探讨血清循环游离DNA(circulating cell-free DNA,cf-DNA)定量及完整性检测在类风湿性关节炎诊疗中的应用价值。进一步探讨这些指标和临床参数之间的相关性,探讨他们在类风湿性关节炎治疗和预后中的作用。方法第一部分收集46例RA患者、42例健康体检者的血清标本,检测各组病例RF、抗-CCP抗体、抗-MCV抗体的含量,同时检测各组病例补体C3(complement 3,C3)、补体 C4(complement 4,C4)、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、中性粒细胞计数(Neutrophil count,NE)、淋巴细胞计数(Lymphocyte count,LY)、病程(患病时间)、关节炎部位数等临床资料,探讨RF、抗-CCP抗体、抗-MCV抗体在RA诊疗中的价值。第二部分构建ALU基因(Alu repetitive sequence,ALU)质粒标准品,倍比稀释建立标准曲线,建立SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法。设计115 bp、247 bp长度的ALU内参基因特异性引物,定量检测46例RA患者、42例健康体检者的血清cf-DNA含量,结合患者的临床病理资料,探讨cf-DNA检测在RA诊疗中的价值。结果第一部分(1)RF对RA诊断的敏感度为82.6%,特异性为83.3%;抗-CCP抗体对RA诊断的敏感度为76.1%,特异性为95.2%;抗-MCV抗体对RA诊断的敏感度为84.8%,特异性为92.9%。单项目检测中,抗-MCV抗体检测的敏感度最高,抗-CCP抗体检测的特异性最高。(2)两项目联合检测,当采用anti-MCV/anti-CCP方法联合检测时,对类风湿性关节炎的诊断效能最高:约登指数为0.816,敏感度为93.5%,特异性为88.1%。(3)三项目联合检测,当采用(RF/anti-CCP)+anti-MCV方法联合检测时,对类风湿性关节炎的诊断效能最高:约登指数为0.826,敏感度为82.6%,特异性为100%。(4)RA患者中,RF阳性率与C反应蛋白(C reactive protein,CRP)水平、病程长短相关(P<0.05),即RF阳性组CRP水平高于阴性组;RF阳性组病程较阴性组长,提示RF含量可能与RA活动性相关。第二部分(1)成功构建ALU内参基因质粒标准品,以此建立标准曲线,建立SYBR Green实时荧光定量PCR检测方法。(2)ALU115基因和ALU247基因含量在RA组和健康对照组之间的差异均有统计学意义(P均<0.001)。(3)RA患者中,cf-DNA阳性率与补体C3水平、NE、RF含量相关(P<0.05),即cf-DNA阳性组补体C3水平低于阴性组;cf-DNA阳性组NE较阴性组高;即cf-DNA阳性组RF含量低于阴性组。提示cf-DNA含量可能与RA活动性相关。结论1.RF、抗-CCP抗体、抗-MCV抗体单一指标对RA均有一定的诊断价值,当采用两两联合或三个指标联合诊断时,可一定程度提高对RA诊断的敏感度和特异性。2.血清cf-DNA含量在RA的诊断中有较高的临床价值,ALU115基因含量对RA诊断的敏感度和特异性均高于RF等传统的RA诊断指标。3.RA患者中,cf-DNA阳性组RF含量低于阴性组,提示cf-DNA检测可能用于RF阴性RA的诊断。4.外周血cf-DNA的检测具有取材方便、操作简单、侵袭性小,易于大规模开展等优点,具有广阔的临床应用前景。