论文部分内容阅读
杨树是我国重要的速生用材树种之一，其经济、生态和社会效益显著。由Lonsdaleaquercinasubsp.quercina引起的杨树细菌性溃疡病是近年我国新发现的杨树毁灭性病害，严重影响着杨树人工林的健康持续发展，建立病害的快速检测体系和进行药剂筛选是科学防控病害的重要举措。本研究以Lonsdaleaquercinasubsp.quercinaN-5-1为代表菌株，建立了病菌的ELISA和LAMP检测体系，同时进行了室内药剂筛选实验，研究结果如下: ELISA检测体系建立:以Lonsdaleaquercinasubsp.quercinaN-5-1为免疫原，用新西兰兔做免疫动物，制作多克隆抗体，所得抗体作为一抗（浓度为11.2mg/ml）。用HRP标记的山羊抗兔抗体作为二抗（浓度为0.8mg/ml），与菌株N-5-1进行免疫学反应，建立ELISA检测体系，该检测体系中的一抗最佳工作浓度为一抗稀释204800倍，检测体系所用包被原初始浓度为1013数量级，检测菌液的最佳浓度为109数量级，最佳反应时间为15min，以水稻白叶枯病菌，姜瘟病菌，烟草青枯病菌为阴性对照，以田间自然感病组织为阳性对照，该检测体系可特异性检测林间的病原细菌。检测体系检测灵敏度高、反应时间短、特异性强。 LAMP检测体系的建立:以gap(A)基因序列片段为目标片段设计3组引物，设置30min，50min，70min不同反应时间和60℃，65℃，75℃不同温度梯度进行扩增，经过筛选和比较，LAMP检测体系的最佳引物为F3，5-CTGGCGCGAAGAAAGTCG-3;B3,5-CGCGTGAACAGTGGTCATC-3;FIP,5-GAAACGATATCCTGGCCAGCGT-CTGGTCCTTCCAAAGACAGC-3;BIP,5-CTTGCACCACTAACTGCTTGGC-AGCGCTTCAACGATACCG-3;最佳反应时间为70min，反应温度为60℃和65℃。其检测体系经过验证，特异性强，灵敏度高。 室内药剂的筛选:以病原细菌Lonsdaleaquercinasubsp.quercinaN-5-1为供试菌株，以多病宁、乙蒜素乳油、辛菌胺醋酸盐水剂、代森锰锌、松脂酸铜、春雷霉素、农用链霉素等7种药剂为参试药剂，选用浓度为103数量级的菌液进行药剂筛选，通过计算抑菌率评价药剂效果。结果显示，多病宁、乙蒜素乳油以及辛菌胺醋酸盐水剂3种药剂防效较好。