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同种异体移植炎症因子(allograft inflammatory factor-1，AIF-1)，又称离子化Ca2+结合调节器(ionized calcium-binding adapter molecule1，Iba1)，最初克隆自大鼠发生慢性排斥反应的同种异体心脏移植物中。到目前为止，许多物种的AIF-1基因已被克隆，包括人、小鼠、鲤鱼、海绵、盘鲍等。AIF-1在大鼠精细胞中高表达，在多种组织及血清中有低蛋白水平存在。AIF-1能够结合并交联肌动蛋白，在巨噬细胞/小胶质细胞细胞骨架的重组中具有重要的作用。在动脉损伤和炎症下的血管平滑肌细胞中，AIF-1可被诱导产生，并能促进其增殖和迁移。此外，子宫内膜异位病人的腹水及类风湿性关节炎患者的关节滑液中，AIF-1的表达上调。AIF-1的表达分布机制及与病理过程的相关性，需要进一步深入研究。 首先我们从毛冠鹿(Elaphodus cephalophus, tufted deer)睾丸cDNA文库中克隆到AIF-1基因。该cDNA具有5’和3’非编码区，从第81个到第518个核苷酸为一开放阅读框，编码一个145 aa的AIF-1蛋白。根据cDNA序列设计引物，将基因克隆至大肠杆菌表达载体pET-28a(+)中诱导表达，并对重组蛋白进行纯化。结果显示，重组质粒经1 mmol/L IPTG诱导4h后，在约20kDa处有一明显条带与理论值大小相近，Western Blot检测其可被抗AIF-1抗体识别，说明表达成功。超声破碎后离心，重组蛋白主要存在于上清液中，可用于制备抗体以进行后续实验。 其次我们检测了不同细胞系中AIF-1 mRNA和蛋白质水平的表达状况。RT-PCR和Western Blot结果显示，AIF-1在HL-60细胞系中高表达，在Jurkat细胞系中表达水平较低。设计引物，从HL-60细胞系中克隆人AIF-1 cDNA，构建真核表达载体pEGFP-C3-AIF-1，pEGFP-N1-AIF-1，通过EGFP示踪AIF-1蛋白的细胞分布。转染Hela、293、MCF-7细胞系后，固定染色，用荧光显微镜拍照。结果显示，与空载体相比，外源融合蛋白过表达，影响了AIF-1在核质上的分布。 最后，序列比较分析确认毛冠鹿AIF-1是AIF-1家族的成员，具有很高的进化保守性，系统发生树显示毛冠鹿与牛、山羊具有较近的亲缘关系，同传统的分类方法一致。