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目的：恶性胶质瘤呈侵袭性生长,手术难以完全切除,术后放射治疗是胶质瘤综合治疗中较为重要的手段。但由于恶性胶质瘤具有放射抗性致其放射治疗效果欠佳,所以人们一直在探索恶性胶质瘤放射抗性的机制及应对方法。最近,多个研究证实microRNAs (miRs)在胶质瘤与正常脑组织间表达存在明显差异。其中,胶质瘤中miR-221与niR-222(miR-221/222)的表达明显高于正常脑组织。同时,有文献报道miR-221／222通过Akt信号通路发挥作用。因此我们拟通过敲低胶质瘤中miR-221／222,抑制Akt通路活性,以达到提高胶质瘤细胞放射敏感性的作用。方法：1.体外实验：胶质瘤U251,LN-229细胞在DMEM完全培养液中常规培养,将上述两种细胞各分为3组,分别是对照组、转染无义序列组和反义miR-221／222共转染组；用Lipofectamine2000进行脂质体共转染反义寡聚核苷酸(反义miR-221／222)；将上述各组细胞用Trizol试剂提取总RNA,用Northern印迹方法测定转染后细胞miR-221、miR-222的表达水平；取对照组、转染无义序列组和反义miR-221／222共转染组细胞分别进行0Gy,2Gy,4Gy,6Gy X线照射(源皮距为100cm,剂量率为320cGy/min,瓦里安600C加速器6MV X线照射1,每组的每个剂量点均重复3次,然后用克隆形成实验验证各组胶质瘤细胞的放射敏感性；Western印迹分析转染和照射前后的各组胶质瘤细胞的pAkt蛋白表达变化。2.体内实验：建立U251裸鼠皮下荷瘤模型,将32只已长成的皮下荷瘤裸鼠分为对照组、照射组、反义miR-221／222转染组和反义miR-221／222转染联合照射组,每组8只,各组裸鼠肿瘤平均体积约50mm3；反义miR-221／222联合X线照射治疗裸鼠皮下移植瘤,观察肿瘤生长水平；Real-time PCR检测治疗后miR-221、miR-222的表达；免疫组化分析各组裸鼠皮下移植瘤组织的pAkt蛋白表达水平结果：Northern印迹分析显示反义miR-221／222可以有效的敲低胶质瘤细胞的miR-221和miR-222的表达水平。克隆形成实验证实反义miR-221／222联合X线照射可增加胶质瘤细胞放射敏感性。Western印迹分析显示反义miR-221／222可下调pAkt蛋白表达。经反义miR-221／222转染联合X线照射治疗后,裸鼠皮下移植瘤生长明显受抑,肿瘤组织中miR-221/miR-222表达水平下降,pAkt蛋白表达水平也明显降低。结论：我们用脂质体共转染反义寡聚核苷酸的方法敲低胶质瘤细胞中miR-221、miR-222的表达,并经Northern印迹证实。在克隆形成实验中显示反义miR-221／222联合X线照射可以明显减少细胞克隆形成率,这说明二者联合治疗胶质瘤细胞可以明显增加细胞的增殖性死亡几率,增加胶质瘤细胞的放射敏感性。经Western印迹分析证实敲低胶质瘤细胞中miR-221、miR-222的表达后pAkt蛋白表达量明显下调。同样,体外研究结果在体内获得证实。我们经反义miR-221/222转染联合X线照射治疗后,裸鼠皮下移植瘤生长明显受抑。肿瘤组织中miR-221／222表达水平,pAkt蛋白表达水平明显降低。种种证据均说明转染反义miR-221／222后,胶质瘤放射敏感性的提高与其pAkt蛋白的表达密切相关。因此,我们认为反义miR-221／222通过抑制Akt通路活性来增加胶质瘤细胞的放射敏感性。这为今后恶性胶质瘤放射治疗联合基因治疗提供新的思路。