【摘 要】
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目的:观察萝卜硫素(Sulforaphane,SFN)和N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)对香烟烟雾提取物(Cigarette smoke extract,CSE)所致的A549细胞损伤是否具有保护作用,是否引
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目的:观察萝卜硫素(Sulforaphane,SFN)和N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)对香烟烟雾提取物(Cigarette smoke extract,CSE)所致的A549细胞损伤是否具有保护作用,是否引起胰岛素样生长因子结合蛋白-3(Insulin-like growth factor binding protein-3,IGFBP-3)的表达水平变化,从而进一步揭示上述损伤与保护的机制。方法:将A549细胞分为四组,分别为未经任何处理的对照组(Control),20%CSE处理组(20%CSE),5μM SFN预处理+20%CSE处理组,1mM NAC+20%CSE处理组。使用MTT比色法,分别测算各组细胞的存活率。利用流式细胞术,荧光染色和AnnexinV-FITC/PI双标记染色,分别计算各组细胞的周期阻滞情况和凋亡情况。使用活性氧荧光探针(DCFH-DA),测定各组细胞内的活性氧簇(ROS)变化。最后,利用RT-qPCR技术和Western Bolt技术分析各组IGFBP-3表达水平的变化。结果:20%CSE处理后,细胞的存活率明显下降,SFN和NAC能在一定程度上拮抗CSE对细胞的影响。根据流式细胞术的分析,20%CSE可以使细胞周期阻滞在G1期,并增加其凋亡率,SFN和NAC可以有效地缓解CSE对细胞周期和生长的影响,形态学表现也符合上述变化。除此之外,SFN和NAC可以抑制CSE暴露后细胞内ROS水平。同时,CSE作用后IGFBP-3在mRNA水平和蛋白水平都明显增高,而在SFN和NAC处理后,IGFBP-3表达水平相比CSE处理组有所下降。结论:CSE造成肺泡上皮细胞的损伤呈量效依赖关系,表现为细胞周期阻滞和凋亡率增高,SFN和NAC可以有效地缓解这种损伤,具有一定的保护作用。同时IGFBP-3的表达水平在上述过程中有明显改变,提示IGFBP-3可能是参与CSE损伤下肺泡上皮细胞生长调控的重要分子。
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