本论文课题来源于南京市医学科技发展重点项目(ZKX07023),旨在中医理论的指导下研究功血饮治疗功能性子宫出血的药效及机理,为本项目后期药品的开发提供科学数据和研究支撑。本论文主要内容包括以下几个部分：一.功血饮治疗功能性子宫出血的止血作用及机制研究通过选取动情期雌性大鼠与雄性大鼠合笼,筛选出怀孕大鼠。于第7天分别灌胃米非司酮溶液和米索前列醇溶液,造成早孕大鼠不完全流产模型,随机分为模型组,宫血宁组,功血饮三个剂量组。另取lO只早孕大鼠为空白对照组。给药后测定子宫出血量,末次给药后,选取处于动情间期的大鼠进行眼眶取血,分离血清,大鼠处死后,迅速摘取子宫、卵巢、肾上腺、脾脏及胸腺并称重,计算其脏器系数,称重后的子宫,置10%福尔马林中固定,石蜡包埋,切片,HE染色,做组织形态学检查。采用放免法测定血清雌二醇(E2),孕酮(P)水平；采用RT-PCR方法获得大鼠子宫ER mRNA、PR mRNA的逆转录表达产物cDNA,用琼脂糖凝胶电泳方法检测,计算机图像分析系统进行统计分析。结果显示击模型组大鼠子宫出血量明显增多,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01)；功血饮5.5、11、22g/kg剂量大鼠与模型组比较,子宫出血量均显著减少(P<0.01)。?模型组大鼠子宫脏器系数下降,具有显著性差异(P<0.01)。功血饮5.5、11、22g/kg剂量组与模型组比较,子宫和卵巢系数均有增加。子宫组织形态学检查也表明功血饮可增加腺体的数目。?功血饮22g/kg能明显升高E2水平(P<0.05)。功血饮5.5、11、22g/kg剂量组均能降低ER mRNA、PR mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。通过采用小鼠断尾法及玻片和毛细玻管法观察功血饮对小鼠凝血、出血时间的影响。结果显示功血饮能明显缩短小鼠出血和凝血时间(P<0.01)。通过采用离体子宫实验法观察功血饮对子宫平滑肌收缩的影响。实验前3 d,每天皮下注射己烯雌酚。实验时颈椎脱臼处死大鼠,剖腹取出子宫,置于与压力换能器相连的麦氏浴槽中,持续供氧,记录正常收缩曲线10 min,然后加入不同浓度的功血饮溶液,分别记录加入药物后的子宫的活动曲线。此外用缩宫素造模后,观察功血饮对子宫收缩的影响。结果显示功血饮中剂量、大剂量组可明显增强子宫平滑肌的收缩频率(p<0.01),且呈剂量依赖性关系,但对子宫收缩的强度影响不大。功血饮各剂量组能增强子宫平滑肌的活动力(p<0.05,p<0.01),并随着浓度的增大而增大；功血饮中、大剂量组可以使缩宫素诱导的子宫异常收缩加强的子宫收缩频率下降(p<0.01)。实验研究表明功血饮能有效减少不完全流产模型大鼠的子宫出血量,增加大鼠性器官的重量,在一定程度上促进子宫和卵巢发育,调节性激素和子宫内膜ER和PR的作用。此外,功血饮能缩短小鼠出血凝血时间,增强离体大鼠子宫平滑肌的收缩频率,收缩强度和活动力,对缩宫素所致的子宫收缩加强有一定的抑制作用,表现为收缩频率的降低,收缩幅度的减小,活动力下降。二.功血饮含药血清对卵巢颗粒细胞的影响通过体外培养大鼠卵巢颗粒细胞,培养24 h后,加入大鼠含药血清,采用MTT法测定OD值和放免法测定上清液中E2和P的含量。结果显示功血饮含药血清各剂量组细胞生长明显提高(p<0.01),表现为促进卵巢颗粒细胞的增殖,促进GC分泌E2和P。通过体外培养大鼠卵巢颗粒细胞,培养24 h后,加入的CdCl2终浓度分别为0uM、10 uM、20uM、40uM、60uM、80uM,37℃、5% CO2培养48 h后,采用MTT比色法于酶联免疫测定仪490 nin波长处测定OD值。结果显示随着CdCl2浓度的增加,OD值降低,提示其呈现剂量依赖性关系。通过体外培养大鼠卵巢颗粒细胞,采用CdCl2造成损伤模型,采用MTT法观察功血饮含药血清对CdCl2损伤的卵巢颗粒细胞的保护作用,放免法观察上清液中E2和P的变化。结果显示功血饮含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞的增殖,促进GC分泌E2和P(p<0.01),保护CdCl2对细胞的损伤。以上系列实验研究表明功血饮含药血清能促进正常卵巢颗粒细胞的增殖和分泌,并能抑制氯化镉对大鼠卵巢颗粒细胞的损伤,具有保护细胞的作用。三.功血饮镇痛抗炎的药效学研究通过缩宫素和冰醋酸致小鼠实验性疼痛模型观察功血饮的镇痛作用,实验结果显示功血饮11、22、44 g/kg剂量组可明显减少缩宫素所致小鼠的扭体反应次数和醋酸所致小鼠的扭体反应次数。通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀和醋酸致毛细血管通透性增加,观察功血饮的抗炎作用,结果显示功血饮1 l、22、44g/kg剂量组对醋酸致小鼠毛细血管通透性增加和二甲苯致小鼠耳壳肿胀有抑制作用。实验研究表明功血饮能对缩宫素所致小鼠子宫痉挛性疼痛有抑制作用,可对抗醋酸所致小鼠的疼痛性反应,具有镇痛作用。此外,功血饮可对抗二甲苯和醋酸所致的炎症反应,具有抗炎作用,在一定程度上缓解功能性子宫出血的疼痛和炎症反应。