睾丸支持细胞的增殖分化能力直接影响精子发生过程、雄性生殖发育。WNTs蛋白可以参与调控支持细胞增殖分化与精子发生。随着生物信息学的发展,关于细胞中lncRNA调控靶基因表达已经成为当前的热点研究。因此关于在支持细胞增殖分化过程中是否存在调控WNTs蛋白表达的lncRNA是一个值得研究的课题。本研究以大足黑山羊为实验对象,通过采集大足黑山羊初生、青春期前期、成熟三个年龄段的睾丸组织,进行高通量测序,预测在睾丸生长发育过程中与WNTs相关的lncRNA,最终筛选出lncRNA WNT3-IT可能靶向调控WNT3的表达。为了验证其对WNT3的表达调控,在体外培养睾丸支持细胞基础上,采用石蜡切片、荧光原位杂交、干扰、过表达、细胞毒性实验、Western blot、qPCR等技术,对lncRNA WNT3-IT与WNT3表达关系进行定位分析、干扰和过表达分析以及对lncRNA WNT3-IT对支持细胞增殖活性与增殖周期进行分析,得到以下结果:1.睾丸组织石蜡切片结果显示,初生的大足黑山羊睾丸中只含有支持细胞与精原干细胞;2月龄的睾丸中已经有支持细胞与精原干细胞的增殖分化但没有精子细胞的存在;9月龄睾丸已经有精子细胞生成,睾丸结构发育完全。2.高通量测序发现一种可能靶向调控WNT3表达的lncRNA,编号为LTCONS-00052549,其序列处于WNT3基因序列的内含子中,根据lncRNA命名规则,我们将其命名为lncRNA WNT3-IT。3.通过qPCR测定WNT3-IT与WNT3在三个年龄段的表达谱,结果表明,其与WNT3的表达谱具有正相关关系。并且通过荧光原位杂交定位分析结果表明,lncRNA WNT3-IT由睾丸支持细胞中表达并在支持细胞细胞质中发挥作用。4.干扰支持细胞WNT3-IT表达后,WNT3的mRNA表达量与蛋白质表达量均显著性下降(P<0.01);而在转染过表达载体组中,WNT3的mRNA表达量与蛋白质表达量均显著性上升(P<0.01)。表明WNT3-IT确实正向调控WNT3的表达。5.通过细胞活性与细胞增殖实验发现,干扰WNT3-IT后,支持细胞的增殖能力与活性均显著性下降(P<0.01),而过表达组的支持细胞则表现出完全相反的结果。表明WNT3-IT的表达有助于支持细胞的增殖与分化。综合以上结果得出结论,lncRNA WNT3-IT可以通过正向调控WNT3的表达从而影响支持细胞增殖分化过程。本研究为探讨影响支持细胞增殖的lncRNA提供了基础数据,为研究WNT3-IT调控WNT3的相关分子机制奠定了基础。