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广西大学陈丽丽和唐文伟对牛耳枫Daphniphyllum calycinum Benth.生物活性的前期测定结果表明,牛耳枫茎叶甲醇粗提物对褐飞虱Nilaparvata lugens stal.长翅型雌成虫和雄成虫的触杀活性较好,对小菜蛾Plutella xylostella L.幼虫也有很好的拒食活性,值得进一步研究。本研究进一步对牛耳枫的生物活性成分进行研究,所得结果如下:
1、牛耳枫的果实和叶粉碎样,以甲醇在室温下冷浸提取,提取液过滤、浓缩后分别得到果实甲醇粗提物和叶甲醇粗提物。牛耳枫果实甲醇粗提物和叶甲醇粗提物用去离子水饱和悬浮,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,各萃取段分别浓缩后得到果实石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物,以及叶石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。
2、采用毛细管微量点滴法,分别测定牛耳枫果实和叶的甲醇粗提物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和水层对褐飞虱长翅型成虫的触杀活性。结果表明,牛耳枫果实粗提物对褐飞虱表现出很好的触杀活性,在10μg/头的剂量下,24 h和48 h死亡率分别达到87.78和90.99%,但牛耳枫叶粗提物对褐飞虱的触杀活性较低;牛耳枫果实石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和水层对褐飞虱均有较好的触杀活性,其中牛耳枫果实的乙酸乙酯萃取物的活性最好,在10μg/头的剂量下,24 h和48 h死亡率分别达到74.68和81.33%,但牛耳枫叶石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和水层对褐飞虱的触杀活性较低。
3、以生长速率法,分别测定牛耳枫果实和叶的甲醇粗提物、石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物对水稻纹枯病菌、番茄白绢病菌和香蕉枯萎病菌菌丝生长抑制活性。牛耳枫果实和叶粗提物对3种病原菌菌丝生长抑制活性较低,在2000 mg/L浓度下,抑菌率均低于50%,但牛耳枫果实和叶的乙酸乙酯萃取物对3种病原菌菌丝生长有较好的抑制活性,在2000 mg/L浓度下,牛耳枫果实乙酸乙酯萃取物对3种病原菌菌丝生长抑制率分别达到100,66.43和84.49%;牛耳枫叶的乙酸乙酯萃取物对3种病原菌菌丝生长抑制率分别达到68.70,59.09和58.35%。生物测定结果表明,牛耳枫的抑菌活性部位是果实和叶的乙酸乙酯萃取层。
4、采用硅胶柱层析、大孔吸附树脂柱层析、凝胶柱层析和溶剂重结晶等方法对牛耳枫生物活性部位-果实和叶的乙酸乙酯萃取层进行分离、纯化,共分离出16个化合物,通过波谱方法鉴定化合物的化学结构。从果实的乙酸乙酯层分离出12个化合物,其中10个化合物的结构鉴定为对甲氧基苯甲酸(N1)、对羟基苯甲醛(N2)、5,7-二羟基色原酮(N3)、对羟基苯甲酸(N6)、反式对羟基肉桂酸(N7)、5,7,4-三羟基-3-甲氧基黄酮(N8)、山柰酚(N9)、β-胡萝卜苷(N10)、木犀草素(N11)、3,4-二羟基苯甲酸(N12)。从叶的乙酸乙酯层分离出4个化合物,其中2个化合物的结构鉴定为槲皮素(N13)和反式对甲氧基肉桂酸(N16)。
5、测定化合物5,7-二羟基色原酮、对羟基苯甲酸、反式对羟基肉桂酸、山柰酚和木犀草素对褐飞虱长翅型雌成虫的触杀活性。结果表明,这5个化合物对褐飞虱长翅型雌成虫的触杀活性较低,在1.0μg/头的浓度下,24 h和48 h死亡率均低于50%。
6、测定对甲氧基苯甲酸、对羟基苯甲醛、5,7-二羟基色原酮、对羟基苯甲酸、反式对羟基肉桂酸、5,7,4-三羟基-3-甲氧基黄酮、山柰酚、木犀草素、3,4-二羟基苯甲酸和槲皮素等10个化合物,对水稻纹枯病菌、番茄白绢病菌和香蕉枯萎病菌3种病原菌菌丝生长抑制活性。其中,5,7,4-三羟基-3-甲氧基黄酮对水稻纹枯病菌、番茄白绢病菌和香蕉枯萎病菌3种病原菌均有较好的抑菌活性,EC50值分别为87.6146,119.8412和103.2056 mg/L,其抑菌毒力低于对照药剂多菌灵,分别是多菌灵的0.039,0.081和0.016倍;山柰酚对水稻纹枯病菌和番茄白绢病菌也有一定的抑菌活性,EC50值分别为92.2667和149.6292 mg/L,其抑菌毒力低于对照药剂多菌灵,分别是多菌灵的0.037和0.065倍。
7、采用MTT比色法,测定对甲氧基苯甲酸、对羟基苯甲醛、5,7-二羟基色原酮、对羟基苯甲酸、对羟基肉桂酸、5,7,4-三羟基-3-甲氧基黄酮、山柰酚、木犀草素、3,4-二羟基苯甲酸和槲皮素等10个化合物,对粉纹夜蛾Hi-5细胞增殖抑制活性。10个化合物中,木犀草素对Hi-5细胞的增殖抑制活性最高,EC50值达到11.2589 mg/L,其细胞毒力略低于对照药剂印楝素A,是印楝素A的0.82倍。