论文部分内容阅读
目的本研究检测分析了 P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）在原发免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia,ITP）中的表达水平及与ITP的激素耐药（glucocorticoid-resistance）现象之间的相关性,探究了肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）这一细胞因子是否能通过 P-糖蛋白介导激素耐药的产生及其产生机制。方法本研究利用流式细胞术（Flow cytometry,FCM）检测P-糖蛋白在健康人、激素耐药型和激素有效型原发免疫性血小板减少症患者的淋巴细胞中的表达水平及其在淋巴细胞、CD4+T,CD8+T,CD19+B淋巴细胞亚群中的转运能力,来分析ITP患者耐药现象的产生与TRAIL和P-gp的相关性。通过酶联免疫吸附测定（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）这一技术检测了 TRAIL在激素耐药型和激素有效型原发免疫性血小板减少症患者血浆中的表达水平及差异。并对激素耐药型ITP患者的淋巴细胞及淋巴细胞亚群用不同浓度TRAIL处理后,利用流式细胞术检测处理前后的P-gp表达水平和转运能力,验证加入不同浓度的TRAIL后患者淋巴细胞中的药物外排能力（可反映激素耐药水平）,并进一步探究TRAIL与P-gp表达水平或转运能力之间是否存在相关性,从而判断TRAIL能否调控P-gp介导ITP激素耐药的产生。结果1.纳入第一部分研究的对象及分组:ITP患者25例,年龄19～85岁,中位年龄58岁,其中男性10名,女性15名。健康体检者13例作为对照组,年龄32～60岁,中位年龄45.5岁,其中男性5名,女性8名。根据疗效将患者分为激素耐药组和激素有效组,激素耐药组为NR患者,激素有效组包括疗效评估为CR和R的患者。纳入第二部分研究的对象:血浆中TRAIL含量的检测及分析的研究对象为ITP患者32例,年龄26～83岁,中位年龄62岁,其中男性14名,女性18名。外源性TRAIL干预对淋巴细胞中P-gp的影响的研究对象为耐药型ITP患者9例,年龄56～86岁,中位年龄71岁,其中男性4名,女性5名。2.健康人、激素耐药型和激素有效型ITP患者的淋巴细胞中P-gp表达水平之间无显著差异（P>0.05）;激素耐药型ITP患者的淋巴细胞中P-gp的转运能力显著高于激素有效型ITP 患者（92.54±2.84 vs 66.09±9.96,t=9.45,P<0.001）和健康人（92.54±2.84 vs 72.56±8.73,t=7.78,P<0.001）,差异有统计学意义;与年龄、性别等因素无关,无统计学差异（P>0.05）。3.激素耐药型ITP患者的CD4+T,CD8+T和CD19+B淋巴细胞亚群中P-gp的转运能力显著高于激素有效型 ITP 患者（73.46±11.24 vs 48.26±12.79,t=4.68,P<0.001;93.71±3.46 vs 73.88±4.75,t=9.30,P<0.001;72.94±15.86 vs 46.19±23.57,t=2.96,P=0.005）和健康人（73.46±11.24 vs 59.32±15.41,t=2.59,P=0.014;93.71±3.46 vs 81.39±6.88,t=5.68,P<0.001;72.94±15.86 vs 48.77±25.62,t=2.63,P=0.013）;健康人 CD4+T 和CD8+T淋巴细胞亚群中P-gp转运能力均高于激素有效型ITP患者（59.32±15.41 vs 48.26±12.79,t=2.15,P=0.039;81.39±6.88 vs 73.88±4.75,t=5.68,P=0.001）,差异有统计学意义;健康人、激素耐药型和激素有效型ITP患者中,CD8+T淋巴细胞中P-gp的转运能力均高于 CD4+T 淋巴细胞（81.39±6.88 vs 59.32±15.41,t=4.72,P<0.001;93.71±3.46 vs 73.46±11.24,t=5.71,P<0.001;73.88±4.75 vs 48.26±12.79,t=7.02,P<0.001）,差异有统计学意义。4.激素有效型ITP患者血浆中的TRAIL浓度水平显著高于激素耐药型ITP患者血浆中的TRAIL 浓度水平（56.31±18.94 vs 37.00±13.25,t=3.298,P=0.003）。5.在质量浓度为1 μg/L和10μg/L的TRAIL干预前后,激素耐药型患者的淋巴细胞中P-gp的表达水平和转运能力的差异没有统计学意义（P>0.05）。结论激素耐药的ITP患者淋巴细胞中P-gp的转运能力显著提高,这提示P-gp参与ITP患者激素耐药机制的形成。TRAIL在激素耐药的ITP患者血浆中的浓度明显减低,而加入了不同浓度的TRAIL后,P-gp的转运能力未见明显变化。这表明TRAIL通过调控P-gp对ITP患者激素耐药的产生和发展的影响,还不明确。