【摘 要】
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自2019年末新型冠状病毒于武汉被发现至今,全球新型冠状病毒肺炎累计确诊病例超4.4亿例,累计死亡病例超602万例。我国通过动态清零和疫苗大规模普及等工作有效控制了疫情的传播与蔓延,但由于新型冠状病毒的不断变异,国内疫情呈现局部高聚集、分散式爆发,导致出现短时间医疗挤兑的问题。同时,根据研究表明,疫苗接种与否直接影响患者的患病程度,所以疫苗接种后SARS-CoV-2中和抗体的分泌也是有效减缓疫情传
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自2019年末新型冠状病毒于武汉被发现至今,全球新型冠状病毒肺炎累计确诊病例超4.4亿例,累计死亡病例超602万例。我国通过动态清零和疫苗大规模普及等工作有效控制了疫情的传播与蔓延,但由于新型冠状病毒的不断变异,国内疫情呈现局部高聚集、分散式爆发,导致出现短时间医疗挤兑的问题。同时,根据研究表明,疫苗接种与否直接影响患者的患病程度,所以疫苗接种后SARS-CoV-2中和抗体的分泌也是有效减缓疫情传播的手段。因此,针对SARS-CoV-2病毒快速检测和疫苗接种效用评价检测的需求,硕士研究生期间工作致力于实现SARS-CoV-2抗原的快速、准确、稳定检测和SARS-CoV-2中和抗体的精确、低成本检测,旨在为疫情的有效防治提供新思路,具体研究工作如下:1、基于乳胶微球的免疫层析检测SARS-CoV-2抗原方法的建立为了实现对SARS-CoV-2抗原快速检测的需求,本文采用乳胶微球作为载体,NHS-EDC作为“桥梁”连接蛋白,实现了化学键对表面蛋白的化学吸附。通过双抗体夹心检测抗原原理,所建立的免疫层析传感器实现了对SARS-CoV-2抗原的快速、准确、低成本检测。在最优条件下,对该免疫层析传感器进行特异性、抗干扰性、重复性、稳定性以及灵敏度测试,均显示出较好的实验结果。为了评估所提出的免疫层析传感器的临床适用性,同时采用免疫层析传感器和r RT-PCR测试了659个样本(230个阳性样本和429个阴性样本),其约登指数为0.9615。表明该免疫层析传感器能够为基层人员实现新冠病毒的早期自查,为控制疫情的进一步蔓延提供了一种良好的辅助检测手段。2、基于冷冻干燥技术的化学发光检测SARS-CoV-2中和抗体方法的建立为了精确、低成本实现对注射新冠疫苗后人体产生SARS-CoV-2中和抗体的有效评价,本文通过冷冻干燥法制备了一种可常温储存运输的化学发光冷冻干燥配套试剂。通过对FC缓冲液配方的优化,使得包被的蛋白能够保持其生物活性以及稳定性。在最佳检测条件下,通过免疫竞争法对其准确度、精度以及稳定性进行了测试,其结果显示变异系数仅为1.93%,回收率为102.20%,同时该混合物可在常温条件下储存一年,与传统的冷链运输存储器相比,该冷冻干燥物同样具有较高的准确度、精度以及稳定性。所提出的冷冻干燥混合物易于使用,便于储存、运输,拥有很高的准确性,对SARS-CoV-2中和抗体的保护评价具有极大的临床应用价值。
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