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猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS），由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起，主要表现为妊娠母猪发生早产、流产、产死胎、弱仔和木乃伊胎，仔猪和育肥猪发生呼吸道疾病，死亡率增加，饲料报酬率降低。该病传播速度极快，是危害我国养猪业的一个重要传染病。疫苗免疫是控制该病发生的一个有效办法，但目前现有疫苗存在许多不足，如PRRSV灭活疫苗免疫剂量大，接种次数多，不能激发黏膜免疫，保护效果不确实；弱毒疫苗虽然可以形成有效的临床保护，但和灭活疫苗一样不能阻止野毒感染，且存在着散毒和毒力返强之忧。所以利用生物技术手段开发能够激发黏膜免疫并能通过血清学方法区分野毒感染的安全和有效的新型PRRS疫苗，来控制在我国日益泛滥的PRRS，是广大养猪企业的迫切需要。为了研制更安全、有效的PRRS新型疫苗，为此我们构建了以伪狂犬病毒（Pseudorabies virus PRV）弱毒疫苗Bartha-K61株为载体表达PRRSV CH-1a株GP5的重组伪狂犬病毒（rPRV-GP5）。本研究以BALB／c小鼠为动物模型评价rPRV-GP5免疫小鼠后对PRRSV所产生的特异性免疫应答并进一步在猪上进行了试验。为了研究表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5蛋白的重组伪狂犬病毒（rPRV-GP5）免疫动物后能否产生针对PRRSV特异性的免疫应答。100只BALB／c小鼠随机分为3组，rPRV-GP5组60只，亲本株Bartha-K61组20只，阴性对照组20只，rPRV-GP5与Bartha-K61组每只鼠滴鼻接种105.0TCID50病毒，接种后rPRV-GP5组每周随机处死6只小鼠，Bartha-K61组2只，空白2只。分离脾细胞，采用RT-PCR方法分析经PRRSV刺激后脾淋巴细胞细胞因子mRNA表达水平，并进行淋巴细胞增殖实验；收集肺、肠、粪便冲洗液和血清，采用间接免疫荧光法检测其中特异性抗GP5的IgA和IgG抗体。试验结果表明，rPRV-GP5免疫组在第4周可检测到针对GP5的IgA和IgG抗体，抗体可分别持续到第7周和第10周。接种后6周的rPRV-GP5组脾细胞在体外特异性抗原刺激下，在培养第16小时可检测到高表达的IFN-γ，24小时后表达量逐渐减少，而IL-4在整个刺激培养过程中表达水平明显低于IFN-γ。淋巴细胞增殖实验结果显示在第8周rPRV-GP5免疫组淋巴细胞增殖指数要显著高于Bartha-K61免疫组和对照组（P＜0.05）。以上结果表明表达PRRSV GP5的重组伪狂犬病毒可以有效的刺激小鼠产生针对PRRSV的特异性体液和细胞免疫应答。为了研究rPRV-GP5对猪预防PRRS的安全性和免疫原性，4-5周龄PRV中和抗体和PRRSV ELISA抗体为阴性的仔猪15头随机分成3组，一组为rPRV-GP5免疫组，滴鼻107.0PFU／头；第二组为伪狂犬病Bartha-K61活疫苗组滴鼻107.0PFU／头；第三组为空白对照组。免疫后每周采凝血，收集血清；第4、5、6、7周采集肝素抗凝血，分离PBMC，进行淋巴细胞增殖实验。结果显示rPRV-GP5免疫组在第4周可检测到针对GP5 IgG的荧光抗体，但第7周以后便检测不到，中和抗体直到实验结束都未检测到。将免疫后6周分离的仔猪PBMC转入6孔板中用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养。每孔加入200μl毒价为105.0 TCID50／ml猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）CH-1a株刺激培养，在24、48、72h收获培养上清。结果显示rPRV-GP5免疫组和空白组细胞上清IL-10含量较刺激前显著升高，IFN-γ的含量在24h到达峰值且较空白组显著升高（P＜0.05）。而淋巴细胞增殖实验结果显示在第4、5周rPRV-GP5免疫组淋巴细胞增殖指数要显著高于Bartha-K61免疫组和对照组（P＜0.05）。以上结果表明rPRV-GP5免疫BALB／c小鼠和仔猪后均可产生针对PRRSV的特异性的体液和细胞免疫应答。