【摘 要】
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目的:赤霉素(gibberellin)是一种广泛应用于农林业生产的植物生长调节剂,具有促进种子萌发,茎伸长,提高坐果率等作用。赤霉素属于低毒农药,但若短期大量摄入或长期在体内蓄积,
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目的:赤霉素(gibberellin)是一种广泛应用于农林业生产的植物生长调节剂,具有促进种子萌发,茎伸长,提高坐果率等作用。赤霉素属于低毒农药,但若短期大量摄入或长期在体内蓄积,会对机体各系统产生严重的损伤。目前,国内外关于赤霉素对人精子运动的影响的实验学研究较少。本研究以人精子为研究对象,在精子培养液中加入不同浓度赤霉素,探讨赤霉素对精子运动力的影响及其氧化应激和细胞凋亡发生的作用机制。方法:精液样本来源于我院男科门诊行精液常规检查的健康男性。(1)将收集的精液梯度离心,筛选出优质精子,后培养于不同赤霉素浓度的培养液中,并于培养的第1、5、9、19小时应用CASA系统检测精子运动情况,尽可能筛选出影响精子运动力的最低赤霉素浓度,及时间,确定最佳浓度及时间后进行以下实验。(2)氧化应激反应检测:应用活性氧检测试剂盒检测精子活性氧(ROS)水平;应用免疫荧光法和蛋白免疫印迹法检测过氧化氢酶(CAT)、过氧化物歧化酶(SOD)蛋白表达水平。(3)凋亡检测:应用Annexin-V-FITC试剂盒检测精子凋亡;应用荧光免疫法和蛋白免疫印迹法检测凋亡蛋白BAX、P53蛋白表达水平。(4)Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性检测:应用ATP检测试剂盒采用紫外线分光光度计法检测精子细胞Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性。结果:1)精子运动力随赤霉素浓度的增加、时间的延长逐渐降低;2)处理组精子细胞ROS水平明显高于对照组(F=21.4,P<0.05),过氧化物歧化酶(SOD)蛋白水平较对照组明显降低(F=28.13,P<0.05);3)凋亡蛋白P53、BAX表达水平较对照组明显升高(F=104.54、59.29,P<0.05);4)Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性较对照组明显降低(F=24.48、18.81,P<0.05)。结论:赤霉素可通过氧化应激反应降低精子运动力,促进精子细胞凋亡。
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