油菜籽中酚类物质提取纯化及其活性功能研究

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油菜系十字花科作物,世界第三大油料作物,分布甚广,除我国以外,加拿大、印度、波兰、法国、巴基斯坦等国家也大量种植。我国油菜籽的种植面积700万公顷以上,产量高达1200多万吨,均居世界之首。目前国内外菜籽的综合利用都距工业化应用还有一段距离,但为了更好的利用油菜籽,还是很有必要重视在油菜籽综合利用方面的科学研究。本文研究了菜籽酚类物质提取工艺,确定了菜籽中酚类物质的最优提取工艺参数;研究了大孔吸附树脂对菜籽中酚类物质的最佳纯化条件,使菜籽酚类物质的纯度大大提高;评价了菜籽酚类物质的体外抗氧化活性;探索了菜籽酚类物质对植物性病原菌(小麦纹枯菌、番茄早疫菌、白菜黑斑菌)的抑制作用,得到最低抑菌浓度。主要研究如下:(1)本实验研究了油菜籽酚类物质的最佳提取工艺。以整粒破碎菜籽为原料,在单因素的基础上,通过Plackett Burman试验筛选出对提取菜籽酚类物质影响较大的四个因素(乙醇浓度、提取时间、提取温度、提取次数),采用响应曲面分析对其进行工艺优化,得到最佳工艺参数:乙醇体积分数65%,提取温度70℃,提取时间50min,料液比1:8(m:V),盐酸含量0.04%,振荡器转速200r/min,提取3次。优化后,菜籽酚物质的提取率为75.39%,与预测模型所得数值接近,可以为菜籽中酚类物质提取提供理论基础。(2)本实验研究了菜籽酚类物质的最佳纯化条件。对8种不同型号的大孔树脂的筛选试验证明,HPD100型大孔树脂对菜籽中酚类物质有较强的吸附和解吸附能力,适用于菜籽中酚类物质的纯化。通过菜籽酚类物质在HPD100树脂上的动态吸附与解吸附研究,确定最佳吸附与解吸附条件:上样溶液质量浓度3.5mg/mL,进样流速3mL/min,乙醇体积分数60%,洗脱流速2mL/min,洗脱体积100mL。纯化后,菜籽中酚类物质的质量分数从原来的3.79%提高到35.48%。说明HPD100型大孔树脂对菜籽中酚类物质的纯化效果较好,能大幅度提高提取物中酚类物质的质量分数。(3)本实验研究了菜籽酚类物质的体外抗氧化活性及其抑菌作用。通过还原能力、ABTS+自由基、DPPH自由基、ORAC四种不同体系测定菜籽酚类物质的抗氧化性。菜籽中酚类物质的还原能力随着浓度的增大相应提高,当浓度为45ug/mL左右时,菜籽酚类物质的还原力和Vc相当;菜籽中酚类物质对ABTS+自由基、DPPH自由基有较强的清除能力,并随浓度的增加而增强,在同一浓度下菜籽酚类物质清除ABTS+自由基和DPPH自由基的能力均低于Vc。菜籽的ORAC值是2.26mmol trolox/g干重,总体抗氧化性低于茶叶。说明菜籽中酚类物质具有适度的抗氧化能力,具有广阔的开发应用前景。菜籽多酚对植物病害茵有一定的抑制作用,并随着浓度的增大抑制效果增强。菜籽多酚对番茄早疫茵的最低抑茵浓度是0.8mg/mL左右,对小麦纹枯菌的MIC值是0.6mg/mL左右,对白菜黑斑菌的MIC值是1.5mg/mL左右。当菜籽多酚的浓度达到6mg/mL时,对这三种植物病害菌的抑制率均达到80%以上。菜籽酚类物质的抗茵作用为开发生物农药提供了一条新思路。
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