目的宫颈癌是发展中国家最常见的癌症之一,严重威胁妇女的健康。目前宫颈癌的发病率和死亡率有增长趋势,临床主要采用手术联合放疗及化疗等治疗方法,但是大多数放疗及化疗药物副作用大对人体伤害重,治疗后严重影响患者的生活质量。因此寻求一种副反应小的辅助放、化疗药物成为迫切需求。鸦胆子油乳是苦木科植物鸦胆子（Brucea javanica）的成熟果实的提取物,研究发现其对癌细胞有较高亲和力,单独应用可以抗癌,具有扶正固本作用;联合放、化疗有增效减毒的作用;提高机体免疫力;保护骨髓造血功能,提升外周血象;毒性小、副作用小,临床应用安全。由于其优点目前已广泛应用到肺癌、转移性脑瘤、肝癌、食管癌等多种恶性肿瘤治疗。同时还可以用于治疗人乳头瘤病毒（Humanpapilloma virus,HPV）相关的扁平疣、寻常疣、尖锐湿疣等治疗,但是还未有用于与HPV感染有关宫颈癌的治疗。本实验选用鸦胆子油乳进行药物实验,观察鸦胆子油乳对体外培养宫颈癌Hela细胞的抑制作用,探讨其对防治HPV相关的宫颈癌的应用前景。本实验以此为目的,进行了如下研究:细胞培养,加鸦胆子油乳药物处理后（1）利用巴氏染色法进行细胞形态学观察;（2）采用MTT法（四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法）检测细胞抑制率;（3）用流式细胞仪检测鸦胆子油乳剂对Hela细胞周期的影响。方法一、细胞培养常规方法复苏冻存的Hela细胞和进行培养。二、细胞形态学观察细胞经不同浓度鸦胆子油乳药物处理后,用倒置显微镜观察细胞生长情况。药物作用48h后,分别收集所有细胞,加入甲醛固定进行巴氏染色,观察细胞形态学的改变。三、细胞抑制率的检测将Hela细胞转移到96孔细胞培养板中,加入不同浓度药物,继续培养24、48和72h,每孔加入MTT和二甲基亚砜（DMSO）,按常规方法用酶标仪在490nm处测吸光度（0D）值。四、细胞周期变化的检测细胞加入鸦胆子油乳,继续孵育48h,收集不同药物浓度处理的Hela细胞,用流式细胞仪检测鸦胆子油乳剂对Hela细胞周期的影响。结果一、细胞形态学改变细胞加药后通过倒置显微镜观察发现:随药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞生长密度下降,皱缩变圆细胞增多,而且一些从瓶壁上脱落形成细胞碎片,大多数细胞呈现不同程度的凋亡和坏死状态。巴氏染色结果:能清楚的看到染色质固缩附着于核膜周边呈半月形的典型形态和发泡的凋亡小体。二、药物对细胞抑制率的检测结果不同浓度的鸦胆子油乳剂对Hela细胞作用24、48、72h后有明显的抑制效果。同一浓度不同时间点间抑制率有显著差异,随作用时间延长,抑制率增高;同一时间点,不同质量浓度间抑制率也有明显差别,随浓度增加,抑制率增高。三、鸦胆子油乳对Hela细胞周期变化的影响在不同浓度鸦胆子油乳作用48h后,流式细胞仪检测细胞周期变化,可以看出随着药物浓度增加,G₀-G₁期细胞比率下降,S期细胞比率显著增加,G₂-M期细胞也增多。经鸦胆子油乳作用后的实验组均检测到有明显凋亡峰出现,并且加入药物浓度大的凋亡峰更大一些。讨论本文首次用鸦胆子油乳体外实验研究观察该药对宫颈癌Hela细胞的抑制作用。由MTT结果显示当作用48h后,不同药物浓度的实验组中抑制率都已超过50%,72h后抑制率几乎都超过80%。表明鸦胆子油乳在体外能够明显抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,对Hela细胞有很强的抑制作用,而且随药物浓度的增加和作用时间的延长其抑制作用增强。细胞的凋亡异常与肿瘤的发生及发展有关,诱导肿瘤细胞凋亡是很多化疗药物的作用机制之一,本研究发现经鸦胆子油乳作用后,巴氏染色显示特征明显的凋亡小体。另外,流式细胞仪检测结果也显示经药物作用的实验组有明显的凋亡峰出现。以上这些均说明鸦胆子油乳抑制Hela细胞的作用机制可能是药物诱导了细胞的凋亡程序。流式细胞仪实验结果证明鸦胆子油乳剂具有影响Hela细胞增殖周期的作用,随着药物浓度增加,G₀-G₁期细胞比率下降,S期细胞比率显著上升,G₂-M期细胞增多。表明鸦胆子油乳主要阻滞Hela细胞于S期和G₂-M期,降低肿瘤细胞分裂能力,抑制其增殖,并通过干扰肿瘤细胞生长代谢,诱发肿瘤细胞凋亡。结论1、鸦胆子油乳对宫颈癌Hela细胞的外观形态、内部结构、增殖率及生长周期都有影响,它可以抑制Hela细胞增殖,诱导细胞凋亡并阻滞细胞的生长周期2、鸦胆子油乳除用于治疗HPV引起的扁平疣、寻常疣、尖锐湿疣及喉乳头状瘤外,对于防治HPV相关的宫颈癌也有一定的应用前景。