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目的:通过体外体内实验,研究姜黄素(Cur)对BD06株狂犬病病毒的防治作用,并初步探讨姜黄素抑制狂犬病病毒(RABV)的相关免疫学机制,为临床应用提供理论依据。方法:本研究包括体外细胞实验和体内动物实验两部分内容。体外实验中采用MTT法检测姜黄素对BHK-21细胞增殖的影响;利用直接免疫荧光法(DFA)观察不同浓度的姜黄素体外对BD06株感染的预防及治疗作用。体内实验中,将14-16g健康雌性昆明小鼠随机分为8组:正常对照组、攻毒组(BD06组)、疫苗组(Vac组)、溶剂对照组(DMSO组)、姜黄素低(25mg/kg,Cur25)、中(50mg/kg,Cur50)、高(100mg/kg,Cur100)剂量组、疫苗+姜黄素组(Vac+Cur50组),采用DFA法,分析不同浓度的姜黄素对BD06株感染小鼠潜伏期的影响;于接种后第2天,采用实时定量PCR检测小鼠血液中IFN-β、GAPDH基因的表达情况;于接种后第3天,第5天采用RT-PCR分析各组小鼠脊髓、脑组织中病毒的移行情况。结果:(1)姜黄素对BHK-21细胞增殖的影响。MTT结果显示,随着姜黄素浓度的增加,与溶剂对照组相比,60mM、80mM剂量组对细胞有明显的抑制作用,细胞存活率下降,差别具有统计学意义(P<0.05),而2.5mM、5mM、10mM、20mM、40mM剂量组细胞存活率变化差别无统计学意义(P>0.05)。(2)姜黄素体外对BD06株感染的治疗作用。与正常对照组相比,溶剂对照组荧光强度没有发生变化,这说明溶剂DMSO并没有抗病毒的作用;10mM、20mM、40mM组均能够降低荧光强度,其中40mM组效果最为明显;2.5mM、5mM组同正常对照组相比,荧光强度没有明显差异。(3)姜黄素体外对BD06株感染的预防作用。DFA结果显示,正常对照组与溶剂对照组中均可以看到大片的感染细胞,这说明预先加入溶剂DMSO,对病毒的侵染没有影响。2.5mM组对病毒侵染的阻断作用效果较弱,仍然可以看到较强的荧光强度以及清晰的细胞形态。与正常对照组相比,5mM、10mM、20mM、40mM组荧光强度逐渐降低,这说明感染细胞数目逐渐变少。(4)姜黄素对BD06感染鼠潜伏期的影响。结果显示,与攻毒组相比,Cur50、Cur100、Vac+Cur50组可以延长BD06感染鼠的潜伏期,差别具有统计学意义(P<0.01),Cur25、Vac组中感染鼠潜伏期改变差别无统计学意义(P>0.05)。与Cur50剂量组相比,Vac+Cur50组、Cur100组中感染鼠潜伏期变化差别无统计学意义(P>0.05)。(5)姜黄素对病毒移行的影响。电泳结果显示:肌肉接种病毒后第3天,攻毒组、Vac组、Cur25组在小鼠脊髓组织中可以检测到RABV,在Cur50、Vac+Cur50组中未看到相应的目的条带。而小脑组织经RT-PCR后,各组中均未见到相应的条带。肌肉接种后第5天,脊髓组织RT-PCR电泳结果显示,除Cur50不能检测到RABV外,其余各组小鼠脊髓组织中均可以看到条带。与接种后第3天比较,其余各组条带强度变亮,以攻毒组中12号样品最为明显。(6)姜黄素对病毒感染鼠外周血中IFN-β基因相对表达的影响。结果显示,攻毒后第2天,溶剂对照组感染小鼠外周血中IFN-β的相对表达量为1.06,使用DMSO后不能影响机体IFN-β的表达。与Vac组相比,Vac+Cur50、Cur50组IFN-β的相对表达量均增加,差别具有统计学意义(P<0.05);Cur50组与Cur25组相比,IFN-β相对量明显提高;结论:(1)体外实验证实,一定剂量的姜黄素对狂犬病病毒感染具有防治作用,其中以40mmol/L剂量组效果最为明显;(2)姜黄素能够延长狂犬病病毒感染鼠的潜伏期至10天,延缓发病时间2-3天;(3)姜黄素能够提高狂犬病病毒感染鼠外周血中IFN-β的基因表达水平。