白垩病是蜜蜂球囊菌引起西方蜜蜂幼虫发病的一种真菌性传染病,在局部区域对养蜂生产造成严重损失。分子技术的发展促进了从分子水平研究蜜蜂健康、筛选分子遗传标记及改良品种遗传特性等途径来降低白垩病的危害,为蜜蜂抗白垩病育种提供了良好思路。前人鉴定出与蜜蜂幼虫抗白垩病相关的遗传区域和一些候选单核苷酸多态性位点,但能够直接应用于养蜂及抗白垩病育种实践的分子标记尚未报道。本研究主要验证蜜蜂幼虫抗白垩病相关的候选单核苷酸多态性位点(Single Nucletide Polymorphisms,SNP)标记,并应用该标记以确认其可靠性,还对SNP分型的方法进行探索,期望降低检测成本、对样本SNP进行快速和准确分型。本研究首先筛选抗白垩病蜂群(CR)和易感病(CS)蜂群,实验室培养这些蜂群的幼虫并进行病原接种以筛选抗白垩病幼虫(Res)和易感病幼虫(Sus)样本;再用Res和Sus样本通过PCR和Sanger测序对获得候选SNP位点进行验证,同时排除假阳性的候选SNP位点,筛选抗白垩病个体特有的SNPs;使用从CR和CS蜂群中随机收集幼虫验证上一步筛选的候选SNP位点。其次检测、比较正在培育的“蜂王浆优质高产抗白垩病蜂种”(蜂强1号意蜂)不同蜂群的抗白垩病能力,进一步确认能否利用筛选出来的SNP位点作为分子辅助选育的新标记;最后尝试利用两种SNP分型方法:TaqMan-MGB探针和改进的等位基因特异性PCR(AS-PCR)对该位点进行高通量分型方法探索。本研究经验证筛选出一个可以评估蜂群抗白垩病能力的SNP分子标记SNP-3。该标记位于MRJP5基因第二个内含子区域内,其在CR蜂群中C等位基因频率(PC)显著大于CS蜂群中的频率(P<0.05),且SNP-3位点PC高的蜂群白垩病发病率较小;“蜂王浆优质高产抗白垩病蜂种”不同蜂群的抗白垩病能力与SNP-3位点PC基因频率相吻合,进一步支持SNP-3标记可以通过检测蜂群PC鉴定蜂群抗白垩病能力强弱,蜂群为C/C基因型的蜂王更可能表现出抗白垩病性状,因此SNP-3可以作为一个分子标记选育抗白垩病的蜂群或蜂王;SNP分型方法探索结果表明本研究所涉及的测序法、探针法和PCR法目前只有测序法能准确鉴定SNP-3基因型及对其所在区域进行基因型分析。这些结果为抗白垩病育种工作提供准确、可靠的分子标记,有望通过蜜蜂抗白垩病育种降低白垩病对养蜂业造成的损失,同时也为研究蜜蜂幼虫抗白垩病性状相关的分子机制提供线索。