【摘 要】
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高致病性禽流感（HPAI）是由H5和H7亚型禽流感病毒（AIV）引起的禽类急性高致病性传染病,被国际兽疫局（OIE）列为A类疾病,在我国被列为一类传染病。鉴于禽流感的危害性及其重要的公共卫
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高致病性禽流感（HPAI）是由H5和H7亚型禽流感病毒（AIV）引起的禽类急性高致病性传染病,被国际兽疫局（OIE）列为A类疾病,在我国被列为一类传染病。鉴于禽流感的危害性及其重要的公共卫生学意义,建立高效特异的快速诊断方法显得尤为重要。本研究利用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIV核蛋白（NP）及H5、H7亚型血凝素（HA）蛋白的单克隆抗体（mAb）,为禽流感的快速检测提供试剂。以H5、H7亚型AIV,真核表达质粒pcDNA3.1-NP免疫6～8w雌性BALB/c小鼠,末次加强免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag-14进行融合。通过HA和HI试验、间接ELISA试验反复筛选阳性克隆,并经有限稀释法进行3次以上亚克隆,共获得9株抗AIV H5亚型HA mAb、4株抗AIV H7亚型HA mAb和5株抗AIV NP mAb的杂交瘤细胞株。9株抗AIV H5亚型HA mAb的腹水HI效价在5×26～5×211之间,免疫球蛋白亚类试剂盒鉴定结果表明:B4D2、B3G5、B4H5、B6A7属于IgM亚类;10F7、B2F4、B3B6、6D6属于IgG1亚类;12H2属于IgG2b亚类。4株抗AIV H7亚型HA mAb的腹水HI效价在5×27～5×211之间,其中2E2属于IgM亚类;2A4属于IgG1亚类;5F5、7G5属于IgG2a亚类。5株抗AIV NP mAb的腹水ELISA效价在25×25～25×210 ,5株mAb均属于IgM亚类。Western-blot分析结果显示,AIV H5亚型HA mAb,6D6、10F7、B3B6、B3G5,能与AIV H5亚型的蛋白在75KD处反应,但不与新城疫病毒（NDV）蛋白发生反应,表明这些mAb能特异性识别AIV H5亚型HA。4株AIV H7亚型HA mAb能
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