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目的 未足月胎膜早破(pretern premature rupture of membrane，PPROM)与宫内感染(intrauterine infection，IAI)，即绒毛膜羊膜炎(chorioamnionitis，CAM)互为因果。肿瘤坏死因子受体相关因子6（tumor necrosis factor receptor-associated factors6，TRAF6）参与调节炎症通路，在宫内感染发病起到重要作用，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4(mammalian ste20-1ikekinase4，MST4)可作用于TRAF6，抑制TRAF6的泛素化，从而发挥抑炎作用。本实验通过检测PPROM患者胎盘组织中TRAF6及MST4的表达，探讨两者相互作用及其在PPROM合并宫内感染的发病机制及临床意义，同时分析TARF6及MST4在PPROM组胎盘中的表达与妊娠结局的关系，探讨TRAF6、MST4对母儿妊娠结局的预测性。 方法 1.选取2015年5月-2016年5月于苏北人民医院产科住院分娩的孕妇90例，其中未足月胎膜早破60例，正常对照组30例。纳入标准:所有孕妇本次妊娠为单胎头位，均排除高血压、糖尿病、自身免疫性疾病、急慢性炎症疾病、传染病及其他内外科合并症。收集研究对象的基本资料，包括孕周、孕产次、体温、分娩前体温、外周血白细胞计数、中性粒细胞计数、降钙素原值、产后产妇体温及围产儿合并症如肺炎及病理性黄疸、败血症、围产儿死亡率。 2.研究对象胎膜组织行苏木素伊红(hematoxylin and eosin，HE)染色，依据HE染色结果分为宫内感染组及非宫内感染组。同时利用免疫组织化学法（immunohistochemistry, IHC）及蛋白质印记法(western blot，WB)检测所有胎盘组织中TRAF6及MST4的表达。用Image-pro-plus6.0软件检测阳性细胞数目及光密度值。并将60例PPROM患者按胎盘组织中TRAF6及MST4的表达强度分成四组，分别比较相应的母儿妊娠结局，并利用SPSS23.0软件进行统计学分析。 结果 1.胎膜组织病理结果:正常对照组中有3例合并宫内感染，占总例数的10％(3/30)，27例未合并宫内感染。PPROM组中有43例合并宫内感染，占总例数的71.66％(43/60)，17例未合并宫内感染。 2.利用单因素方差ANOVA进行三组之间一般资料的分析，其中正常对照组30例，PPROM未合并宫内感染组17例，PPROM合并宫内感染组43例。三组研究对象的年龄、孕次、产次、BMI、体温、母体外周血白细胞计数、中性粒细胞计数、降钙素原值、Apgar评分均无统计学差异。PPROM组的孕周均小于正常对照组(F=46.41，P＜0.05)，相应的PPROM组的新生儿体重低于足月儿体重(F=31.73，P＜0.05)。但PPROM合并宫内感染与PPROM未合并宫内感染中孕周及新生儿体重无统计学差异。 3.期待时间与宫内感染的关系分析:60例PPROM中的破膜至新生儿出生的时间间隔，在宫内感染组中小于12小时的有11例，12-24小时有10例，超过24小时的有22例。无宫内感染组中小于12小时有7例，12-24小时有5例，超过24小时有5例。两组的破膜时长无统计学差异(x2=2.45，P=0.29)。 4.免疫组化结果: (1) TRAF6的表达主要定位于滋养层细胞核中，其中43例胎膜早破合并宫内感染组中，TRAF6阳性表达有42例(97.67％)，其中21例为强阳性表达(48.84％)，12例为中度阳性表达(27.91％)，9例为弱阳性表达(20.93％);在17例PPROM为合并宫内感染组中，TRAF6阳性表达的有7例(41.18％)，其中1例为中度阳性表达(5.88％)，6例为弱阳性表达的(35.29％);30例正常对照组中，TRAF6阳性表达有12例(40.00％)，其中2例为中度阳性表达(6.67％)、10例为弱阳性表达(33.33％)。PPROM合并宫内感染组胎盘TRAF6的表达明显强于正常对照组、PPROM未合并宫内感染组(x2=47.84，p＜0.05;x2=32.87，P＜0.05)，PPROM未合并宫内感染与正常对照组无统计学异常(x2=0.29，P=0.58)。 (2) MST4在正常胎盘组织中细胞核及细胞质均有表达。正常对照组、PPROM未合并宫内感染组、PPROM合并宫内感染组MOD值分别为0.03336±0.011，0.03393±0.012，0.05630±0.012。MST4在PPROM合并宫内感染的胎盘组织中表达显著高于正常对照组、PPROM未合并宫内感染组(F=42.69，P＜0.05)。 (3)利用Spearman等级相关资料分析不同胎盘组织中TRAF6及MST4表达的相关性。结果显示在胎盘组织中TRAF6的表达与MST4的表达存在正相关性(rs=0.69，P＜0.05)，即TRAF6表达越强，MST4表达越强。 5.Western blot结果: 利用western blot蛋白印迹法检测正常对照组、PPROM未合并宫内感染组及PPROM合并宫内感染组中TRAF6及MST4的表达。正常对照组、PPROM未合并宫内感染组、PPROM合并宫内感染组中TRAF6的相对灰度表达水平为2.02±0.25，1.94±0.18，3.34±0.34，PPROM合并宫内感染组中的TRAF6相对灰度表达水平明显高于正常对照组、PPROM未合并宫内感染组(F=256.01，P＜0.05)。正常对照组、PPROM未合并宫内感染组、PPROM合并宫内感染组中MST4的相对灰度表达水平为0.29±0.04，0.27±0.03，1.55±0.25，PPROM合并宫内感染组中的MST4相对灰度表达水平明显高于正常对照组、PPROM未合并宫内感染组(F=568.53，P＜0.05)，正常对照组与PPROM未合并宫内感染组无明显差异。 6.TRAF6及MST4与妊娠结局的关系 TRAF6与MST4的表达程度与破膜孕周、产妇产后发热、新生儿败血症及围产期死亡率无关(P＞0.05)，而与新生儿入NICU率、新生儿肺部感染及病理性黄疸发生率存在相关性(P＜0.05)。 结论 1.TRAF6与MST4参与了PPROM合并宫内感染的发生，但具体作用机制尚未明确。 2.TRAF6及MST4升高预示着新生儿出现肺部感染、病理性黄疸的可能性更高。