本研究采用RT-PCR技术扩增A/Swine/Anhui/01/06(H3N8)亚型猪流感病毒神经氨酸酶NA基因,然后将该基因克隆到pET-28a(+)原核表达载体中,构建原核表达载体pET-NA;经用PCR、双酶切和DNA核苷酸序列测定等方法鉴定,得到阳性重组质粒；再将阳性质粒转化至宿主菌E.coliBL21感受态细胞中,用卡那霉素抗性筛选得到稳定表达的阳性质粒转化宿主菌BL21；在37℃,1mmol/LIPTG诱导3h条件下宿主菌BL21成功表达重组蛋白；表达产物经SDS-PAGE分析,重组蛋白主要以包涵体的形式存在,改变IPTG浓度和降低诱导温度,无法使目的蛋白可溶性表达；将转化后宿主菌BL21在不同IPTG浓度和不同培养时间下进行诱导,得到表达NA基因的最佳诱导浓度为1mmol/L和最佳诱导时间为6h；表达蛋白经尿素变性与复性,得到纯化的可溶性重组蛋白。用Western blot分析表明,表达产物能与H3N8亚型猪流感病毒(SIV)功感染猪阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫学活性。以纯化后的重组蛋白作为包被抗原建立了检测H3N8亚型SIV抗体的间接ELISA方法。通过反应条件的优化,得出间接ELISA最佳工作条件：抗原包被浓度为8.68×10-4μg/ml；血清稀释度为1：80；封闭液为5%脱脂乳；封闭时间为1.5h；一抗作用时间为0.5h；酶标抗体稀释倍数为1：1000；酶标抗体作用时间为0.5h。阴阳性血清的判断标准分别确定为OD630nm≤0.307和OD630nm≥0.353。通过特异性试验结果显示,该方法与H1、H5亚型SIV以及猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病等相关猪病阳性血清无交叉反应。通过重复性试验表明,用同一批制备的重组蛋白包被ELISA板的批内变异系数在3.60%～7.50%之间；用同一批制备的重组蛋白包被ELISA板的批间变异系在3.38%～7.89%之间。分别用已建立的间接ELISA方法和血凝抑制试验(HI)对临床猪血清检测结果进行对比。结果显示,间接ELISA方法与血凝抑制试验(HI)的阳性率分别为26.2%和8.93%,两者总符合率为82.7%。该间接ELISA方法的重复性好,敏感性较高,特异性强,为SIV防制提供了一种准确、快捷、简便、有效的技术手段,同时为SIV亚型猪流感疫苗的研究及其检测试剂盒的研制奠定了一定的基础。