【摘 要】
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目的:应用多重RT-PCR技术检测软组织小圆细胞肉瘤的融合基因的表达,为临床小圆细胞肿瘤的诊断提供有力的分子依据和简便的诊断方法。同时对石蜡包埋肿瘤组织中的组织处理、核
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目的:应用多重RT-PCR技术检测软组织小圆细胞肉瘤的融合基因的表达,为临床小圆细胞肿瘤的诊断提供有力的分子依据和简便的诊断方法。同时对石蜡包埋肿瘤组织中的组织处理、核酸提取进行探索。建立并优化一套稳定、高效的诊断恶性软组织小圆细胞肿瘤的分子诊断技术方法。方法:收集石河子大学医学院第一附属医院病理科及新疆维吾尔自治区人民医院30年间(1968年-2005年)软组织小圆细胞肿瘤43例,其中20例尤因氏肉瘤/原始神经外胚层瘤(ES/PNET),5例低分化和上皮为主型滑膜肉瘤(SS),9例腺泡状横纹肌肉瘤(ARMS),3例粘液脂肪肉瘤,6例胚胎型横纹肌肉瘤。对照组22例,包括10例恶性B细胞性淋巴瘤,1例神经母细胞瘤,11例双相型和单相纤维型SS。结合PrimerPrimier5和Oligo6.0软件及引物设计原则设计多重引物,应用多重巢式RT-PCR技术检测EWS-FLI、PAX3-FKHR、SYT-SSX融合基因的表达,并将其与传统的RT-PCR进行比较。另外收集石蜡包埋软组织肿瘤及淋巴瘤50例,分别应用Trizol和AGPC法提取RNA,来比较两种提取方法。收集新鲜肿瘤组织8例,用PBS缓冲液配制的10%中性福尔马林固定液进行6小时、12小时、24小时不同时间的固定,比较它们的核酸含量和组织形态学,同时将PBS缓冲液配制的10%中性福尔马林固定液与临床使用的福尔马林固定液进行了比较,从而寻找出既能保证组织形态学完好性又能更好的保存组织中核酸含量的固定方法。结果:经测序证实,43例中检出融合基因阳性24例,其中20例ES/PNET中14例EWS-FLI1阳性(70%)、9例ARMS中6例PAX3-FKHR阳性(66.7%)、5例SS中4例SYT-SSX阳性(80.0%), 3例粘液脂肪肉瘤, 6例胚胎横纹肌肉瘤均未检测出以
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