【摘 要】
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目的:甲状腺切除术后甲状旁腺功能减退症是一种常见的,灾难性的,医源性损伤,发生率较高。目前现有的药物替代疗法效果不尽如人意。探索建立脂肪源性干细胞（ADSCs）分化成甲状旁腺样细胞的方法,从而找到可供甲状旁腺自体移植充足的种子细胞,为临床彻底治愈甲旁减开辟一条新途径。方法:切取SD大鼠腹股沟区脂肪,采用酶消化法和细胞贴壁分离的方法,分离、培养和纯化出ADSCs,行成脂诱导和成骨诱导,进行细胞鉴定。
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目的:甲状腺切除术后甲状旁腺功能减退症是一种常见的,灾难性的,医源性损伤,发生率较高。目前现有的药物替代疗法效果不尽如人意。探索建立脂肪源性干细胞（ADSCs）分化成甲状旁腺样细胞的方法,从而找到可供甲状旁腺自体移植充足的种子细胞,为临床彻底治愈甲旁减开辟一条新途径。方法:切取SD大鼠腹股沟区脂肪,采用酶消化法和细胞贴壁分离的方法,分离、培养和纯化出ADSCs,行成脂诱导和成骨诱导,进行细胞鉴定。取第五代的ADSCs,分为对照组和Shh（100ng/ml）和三种不同浓度的Activin A（25ng/mL,50ng/mL,75ng/mL）作用组。在诱导的7d、14d、21d应用酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测甲状旁腺素（PTH）的含量,蛋白免疫印迹（Western blot）检测细胞中CaSR、PTH和Gcm2的蛋白表达量,PCR检测分化细胞中CaSR、PTH和Gcm2的mRNA表达量。结果:成脂诱导和成骨诱导分化成功,证明为ADSCs。ADSCs在Shh和Activin A的作用下,培养液中检测出PTH,并存在诱导浓度和时间依赖性。以Shh 100ng/ml和Activin A 75ng/ml作用21d的实验组为最高,与对照组相比具有统计学差异。CaSR、PTH、Gcm2的蛋白表达量和mRNA表达量,其趋势与ELISA的检测结果相同。结论:从脂肪组织中可成功分离、提纯出ADSCs,并在Shh和Activin A的共同作用下,能够进一步分化成甲状旁腺样细胞。其最佳诱导浓度为Shh 100ng/ml、Activin A 75ng/ml,最佳作用时间为21d。为甲状旁腺自体移植治疗甲旁减提供充足的种子细胞,为这一技术的临床应用奠定理论和实践基础。
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