BubR1基因在肝癌细胞中的表达及其SiRNA转染体的构建

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目的:研究BubR1在乙肝病毒阳性及乙肝病毒阴性HCC细胞中的表达差异,明确BubR1与乙肝病毒阴性HCC细胞相关性,并筛选出BubR1表达最高的乙肝病毒阳性肝癌细胞。筛选最佳转染条件为后续研究BubR1在体外对HBV阳性HCC细胞生物学行为的影响以及BubR1与HBX相关性研究提供依据。方法:应用PCR技术和Western-blot技术检测HBV阴性肝癌细胞(HepG2、SMMC-7721、MHCC97H)及HBV阳性肝癌细胞(HepG2.2.15、Hep3B)中BubR1表达情况,筛选BubR1基因高表达HBV阳性肝癌细胞株,构建pEGFP-SiBubR1质粒,稳定转染到高表达HBV阳性肝癌细胞筛选沉默效果最佳序列。结果:通过RT-PCR技术检测结果显示,BubR1RNA在HBV阳性肝癌细胞中表达高于HBV阴性肝癌细胞,其中HepG2.2.15中的表达水平最高;Western-blot技术检测结果显示,BubR1蛋白在HBV阳性肝癌细胞中表达高于HBV阴性肝癌细胞,其中HepG2.2.15中的表达水平最高;3个特异性siRNA-BubR1组转染后,HBV阳性肝癌细胞中BubR1的mRNA表达和蛋白表达明显降低,其中又以siRNA-BubR1-3转染组抑制效果最明显。结论:BubR1在HBV阳性肝癌细胞中表达高于HBV阴性肝癌细胞,其中HepG2.2.15表达最高。SiRNA转染后能明显降低HBV阳性肝癌细胞中BubR1mRNA和蛋白的表达,siRNA-BubR1-3转染组抑制效果最明显。BubR1与乙肝病毒阳性肝癌细胞明显存在相关性,筛选出BubR1表达最高的乙肝病毒阳性肝癌细胞株和转染条件将为进一步研究BubR1在体外对HBV阳性HCC细胞生物学行为的影响以及BubR1与HBX相关性研究提供依据。
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