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阿苯达唑（ABZ）为苯并咪唑类广谱驱虫药，被广泛用于人和动物的寄生虫病预防和治疗。其在体内被代谢成以阿苯达唑亚砜（ABZSO）、阿苯达唑砜（ABZSO2）和阿苯达唑-2-氨基砜（ABZSO2NH2）为主要代谢产物的一系列化合物，广泛分布于动物机体的各组织器官。阿苯达唑以及其代谢物具有致畸性和胚胎毒性，已引起世界各国的高度重视，被列为食品残留重点监控对象之一。因此开展对阿苯达唑残留检测方法的研究对于控制其残留，保障人类的健康具有重要意义。 目前对于动物性食品中阿苯达唑及其代谢物残留的检测方法主要是以高效液相色谱（HPLC）为主的仪器分析法。仪器分析法具有准确性好、分离度高并且可进行多残留检测的定性、定量研究的特点，但是需要昂贵的仪器、繁琐的前处理、熟练的专业操作员，不适用于大批量样品的检测，因此需要建立一种简便快速的样品检测方法。酶联免疫分析法（ELISA）集现代测试方法的高灵敏性和抗原–抗体反应的强特异性于一体。相对于仪器分析法，酶联免疫分析法具有操作简单、快速、灵敏度高、特异性强、检测费用低等优点，适用于大批量样品的初筛。到目前为止，还没有商品化的阿苯达唑ELISA检测试剂盒出售，而已报道的有关阿苯达唑的ELISA检测方法尚存在缺陷，因此研究开发一种适用于多种动物性食品中阿苯达唑残留快速检测的ELISA试剂盒具有重要的实用价值。 本研究通过半抗原、抗原的合成和单克隆抗体制备技术，筛选出能分泌识别阿苯达唑残留标示物的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并利用制备的单克隆抗体建立了可检测阿苯达唑残留标示物的ELISA方法并组装成试剂盒。主要的研究内容和结果如下。 1.通过化学方法合成了阿苯达唑-2-氨基亚砜（ABZSONH2）和2–羧丁酰胺基阿苯达唑砜（ABZSO2NH2–SA）两种化合物，产物经紫外光谱、红外光谱、液相色谱、质谱鉴定，证明这两种化合物合成成功。分别以ABZSONH2和ABZSO2NH2为半抗原，以牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）为载体蛋白，通过丁二酸酐法和戊二醛法偶联制备了ABZSO2NH2–GA–BSA（ OVA）、ABZSONH2–GA–BSA（OVA）和ABZSO2NH2–SA–BSA（OVA）等人工抗原，并采用紫外光谱法进行定性和定量鉴定。偶联物与载体蛋白相比，其紫外吸收光谱发生明显变化，表明人工抗原合成成功。 2.分别将ABZSO2NH2–GA–BSA、ABZSONH2–GA–BSA和ABZSO2NH2–SA–BSA三种免疫原免疫雌性Balb/C小鼠，ELISA法监测小鼠血清效价考察免疫效果。结果表明，以戊二醛法制备的免疫原具有更好的免疫原性。选择每组免疫小鼠中血清效价最高的用于杂交瘤细胞制备，取其脾细胞与鼠骨髓瘤细胞（SP2/0）融合，通过ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞并进行亚克隆建株。经过多次融合筛选，最终以ABZSO2NH2–GA–BSA免疫原建立了满足要求的杂交瘤细胞株GA/2A11。杂交瘤细胞染色体计数平均为94.4，表明是由两亲本细胞融合而成。采用小鼠体内诱生腹水方法制备单克隆抗体，经标准分型抗体鉴定该单克隆抗体为IgG2a亚型，效价为1:106。抗体的特异性强，只对阿苯达唑砜有交叉反应，而与其它苯并咪唑类药物或代谢物均无交叉反应。 3.以ABZSO2NH2–GA–OVA为包被原、ABZSO2NH2为标准品溶液，优化了ELISA检测条件，建立检测阿苯达唑残留标示物ABZSO2NH2的间接竞争ELISA方法。结果表明，ABZSO2NH2–GA–OVA的最佳包被浓度为0.25μg/ml，单克隆抗体的最佳稀释度为1:200000；标准曲线回归方程为：y＝－0.494x＋1.448，r＝0.997，IC50值为90.61±8.29（n＝5），线性范围为20～320μg/L。将肌肉（牛、羊、猪、鸡、鱼）、肝脏（牛、羊、猪、鸡）、牛奶或鸡蛋等组织样品添加0、0.5×MRL、MRL和2×MRL浓度的ABZSO2NH2标准品溶液，组织样品分别用50%氢氧化钾或1mol/L碳酸钠溶液碱化后，乙酸乙酯提取，氮气吹干，残渣加入正己烷去脂，磷酸盐缓冲液溶解后ELISA检测并计算最低检测限、Cut–off值、回收率与变异系数。结果表明，各组织的添加回收率在70%～110%范围内，批内与批间变异系数＜20%，说明本研究建立的检测方法的准确性和重复性好。动物喂养实验和HPLC比对试验表明本试剂盒检测结果可靠。 4.对抗原、抗体等敏感试剂进行稳定性研究，并研制可用于常规储存条件（4℃）的抗体保护剂。抗原与抗体都能在常规储存条件下长期稳定。最后根据商品化的要求将有关ELISA检测的材料组装成试剂盒。 本研究分别以ABZSONH2和ABZSO2NH2为半抗原，并以不同的连接方式与载体蛋白偶联制备人工抗原，考察了抗原结构与抗体性能的关系，对研究苯并咪唑类药物结构的免疫原性与小分子化合物的抗原设计具有参考价值。将合成的人工免疫原免疫小鼠制备了可识别阿苯达唑残留标识物 ABZSO2NH2的单克隆抗体，并以该抗体建立了检测多种动物组织样品中阿苯达唑残留的ELISA方法，组装成试剂盒，这些在国内外皆为首创，具有一定的学术意义和实用价值。