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结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,在我国其发病率在逐年升高的趋势。虽然随着手术及相关诊疗技术的提高,结直肠癌患者的生存率有了很大提高,但病死率仍很高。导致结直肠癌患者死亡的主要原因是复发和转移,因此,充分的研究结直肠癌的复发及侵袭转移机制,对降低结直肠癌的病死率有着重要作用。 δ-连环蛋白(δ-catenin)拥有10个犰狳(Armadillo,Arm)重复结构,属于连环蛋白家族的成员之一。很多研究证实δ-catenin与癌症的发生有着着密切的联系。有报道证实,结直肠癌组织中δ-catenin的高表达与肿瘤细胞增殖正相关。然而,结直肠癌组织中δ-catenin的表达与肿瘤细胞的侵袭转移是否相关仍无报道。 CD31又称为血小板-内皮细胞粘附分子。在免疫组化中,CD31是主要用于证明内皮细胞组织的存在,用于评估肿瘤血管生成,这可能意味着一个快速增长的肿瘤的程度。 在本研究中,我们检测了60例CRC样本中δ-catenin与CD31的表达情况并应用Western Blotting检测结直肠癌及癌旁正常肠粘膜组织中δ-catenin及VEGF的蛋白和mRNA表达情况。 材料与方法: 一、标本与病人资料 选取中国医科大学附属盛京医院2004-2010年的60例的结直肠癌患者标本及10例的正常结直肠组织存档蜡块。其中男性32例,女性28例,年龄34-83岁(中位年龄60岁)。术前未接受放疗和化疗。以UICC的TNM病理分期第六版为标准:Ⅰ期8例,Ⅱ期23例,Ⅲ期22例,Ⅳ期7例。收入病例均为腺癌:其中高分化18例,中分化30例,低分化12例。我们还另外收集了20例新鲜结直肠癌及癌旁的正常肠粘膜组织(距癌灶最远端,至少距癌灶边缘5cm以上)用于提取蛋白质,标本取出后立即放入-80℃冰箱保存备用。 二、免疫组织化学染色 采用Streptavidin-Peroxidase(SP)免疫组织化学方法进行染色,检测δ-catenin和CD31在60例的结直肠癌标本中的表达及其与各临床病理因素之间的关系,并在高倍镜(×400)下分别计数至少5个视野的微血管数,取其平均值作为每例的MVD。 三、蛋白免疫印迹(Western Blot)方法 将含50μg总蛋白的裂解产物进行SDS-PAGE电泳后,转印至PVDF膜,单克隆抗体δ-catenin或小鼠抗人VEGF4℃孵育过夜,辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵育2小时后ECL显色。 结果: 一、δ-catenin在结直肠癌组织中高表达并与血管生成具有相关性 通过免疫组化实验,我们检测了60例的结直肠癌组织及10例的癌旁正常肠粘膜组织中δ-catenin及CD31的表达情况。δ-catenin阳性表达与肿瘤组织分化程度显著相关。δ-catenin表达阳性的结直肠癌组织中MVD(44.86±8.74)显著高于δ-catenin表达阴性的结直肠癌组织中的MVD(38.78±10.17),二者之间有显著的统计学差异。 二、δ-catenin在结直肠癌组织中表达上调,而且与肿瘤VEGF表达水平呈正相关 在20例结直肠癌组织中,δ-catenin和VEGF表达的相对灰度值分别1.03±0.20和0.82±0.23。统计学分析显示,二者表达水平具有显著相关性(r=0.567,P=0.009)。我们的结果表明,δ-catenin在结直肠癌组织中表达上调,而且与肿瘤VEGF表达水平呈正相关。 结论: 1.δ-catenin在结肠癌中的异常表达与肿瘤血管生成正相关。 2.δ-catenin的表达变化影响VEGF的转录及蛋白表达水平。δ-catenin可能通过上调VEGF的蛋白表达促进结直肠癌血管生成,进而促进结直肠癌的转移。