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白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)是一种宿主范围广、传染能力强、致死率极高的病原体,白斑综合征的爆发给全球的虾类养殖业造成了严重的经济损失。鉴于对WSSV的致病机理及宿主的抗病毒免疫机制仍不是完全清楚,迄今为止仍未找到一个有效的方法可以根治WSSV。负向延伸因子(Negative elongation factor,NELF)在调节与细胞周期控制、增殖、代谢、DNA修复以及细胞对刺激和应激反应有关基因的表达中发挥着重要的作用。同时,NELF参与的转录延伸也是致病病毒基因表达的一个关键环节。然而在无脊椎动物中NELF是否具有抗病毒功能却尚无报道。本研究从红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)中克隆获得了的负向延伸因子B和E的cDNA序列(命名为CqNELF-B和CqNELF-E),CqNELF-B cDNA部分序列为2107 bp,包括ORF 1743 bp,5’-UTR 202 bp和162 bp3’-UTR,编码580个氨基酸残基,含有一个COBRA-1结构域。CqNELF-E cDNA全长序列为1753 bp,包括ORF 816 bp,5’-UTR 193 bp和3’-UTR 744 bp,编码271个氨基酸残基,包含一个同源异构相关的亮氨酸拉链HALZ和RNA识别基序RRM。多序列比对和系统发育树构建表明,CqNELF-B和CqNELF-E进化程度上与虾蟹类甲壳动物的同源性比较高。组织分布结果显示CqNELF-B和CqNELF-E在不同组织器官均有不同程度表达,二者在肌肉中的表达量最高,但是在鳃、心脏和肠道中的表达量都较低。另外WSSV感染实验表明CqNELF-B在WSSV感染6h后其mRNA转录水平显著上调;相似地,CqNELF-E的mRNA转录水平在WSSV感染6h和12h显著上调。更进一步的,RNA干扰实验发现在CqNELF-B和CqNELF-E分别敲降后,WSSV的IEi和VP28的转录水平在3 h、6h和12h均显著上调,表明了CqNELF-和CqNELF-E在抗病毒免疫方面具有潜在的功能。考虑到CqNELF-B和CqNELF-E在调控基因转录方面发挥的作用,我们进行了双荧光素酶报告基因检测,结果表明CqNELF-B和CqNELF-E基因在SF9细胞中的高表达可以明显抑制WSSV的极早期基因启动子(WSV051、IE1和WSV083)的启动效率。综上所述,CqNELF-B和CqNELF-E在红螯螯虾WSSV的免疫防御中起着重要的作用,为治疗WSSV引起的甲壳动物病害提供了潜在的药物靶点。