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目的:本实验以大鼠甩尾潜伏期(TFL)作为痛阈指标，采用放射免疫测定法(RIA)检测cAMP和cGMP的含量，大鼠尾核内微量注射Apelin观察其在大鼠中枢痛觉调制中的作用及其可能的作用机制。
方法:
1.大鼠尾核内埋管：根据L.J.Pellegrino鼠脑定向图谱在相当于大鼠尾核的颅骨部位(A:1.0 mm；LR:2.8 mm；H:5.0 mm)钻孔埋管，手术3天后用于实验。
2.痛阈测定：以辐射热作为伤害性刺激，采用大鼠的甩尾潜伏期作为痛阈指标，各组大鼠分别在给药前、后测定其TFL值并计算痛阈变化率。
3.cAMP和cGMP的放射免疫测定：大鼠尾核内给药40min后取血取脑，按照试剂盒说明书进行样品处理，采用放射免疫测定法检测动物尾核与血浆中cAMP、cGMP的含量。
4.实验分组
(1)尾核内微量注射Apelin对大鼠热伤害性反应的影响。雄性SD大鼠随机分组如下：①生理盐水对照组；②吗啡对照组；③Apelin 10-3 mol/L组；④Apelin 10-4 mol/L组；⑤Apelin 10-5 mol/L组；⑥Apelin 10-6 mol/L组。每组10只。按照分组分别向大鼠尾核内微量注射0.5 μl不同药物，观察给药后90 min内大鼠的痛阈变化情况，分析Apelin对大鼠热伤害性反应的影响。
(2)大鼠尾核内微量注射Apelin(10-4 mol/L)对吗啡中枢镇痛作用的影响。雄性SD大鼠随机分组如下：①生理盐水对照组；②吗啡对照组；③Apelin组；④吗啡+Apelin组；⑤纳络酮+Apelin组。每组10只。尾核内两种药物给药时间间隔为5 min，每次注射药物0.5μl，对照组给药方式同实验组。观察给药后90 min内大鼠的痛阈变化情况，分析Apelin对吗啡中枢镇痛作用的影响。
(3)尾核内微量注射Apelin对大鼠血浆与尾核中cAMP和cGMP含量的影响。雄性SD大鼠随机分组如下：①生理盐水对照组；②吗啡对照组；③Apelin 10-3 mol/L组；④Apelin 10-4 mol/L组：⑤Apelin 10-5 mol/L组；⑥Apelin 10-6 mol/L组。每组6只。按照分组分别向大鼠尾核内注射0.5μl不同药物，40 min后取材测定cAMP和cGMP含量。
(4)尾核内微量注射吗啡后再注射Apelin(10-4 mol/L)对大鼠尾核与血浆中cAMP和cGMP含量的影响。雄性SD大鼠随机分组如下：①生理盐水对照组；②吗啡对照组；③Apelin组；④吗啡+Apelin组。每组6只。两次给药时间间隔5 min，每次给药剂量0.5μl，给药40 min后取材测定cAMP和cGMP含量。
结果:
1.尾核内微量注射不同浓度的Apelin后，结果显示大鼠痛阈表现不同程度的下降。在Apelin浓度为10-3 mol/L～10-6 mol/L的范围内，大鼠痛阈下降幅度呈近似倒置钟形，其中Apelin 10-4 mol/L浓度组大鼠痛阈下降幅度最显著。大鼠尾核内微量注射0.5μl浓度为10-4 mol/L的Apelin 10 min后，痛阈下降-9.22％±1.26％，40 min后痛阈下降至最低-16.95％±1.46％，分别与生理盐水组(-0.32％±1.2％、0.17％±0.80％)比较有统计学意义。提示在中枢痛觉调制过程中，Apelin易化大鼠的热伤害性反应，在中枢神经系统中(CNS)有痛敏作用。
2.大鼠尾核内微量注射0.5μl吗啡，5 min后再注射0.5μl Apelin(10-4 mol/L)，结果发现在90 min的观察期内，Apelin能抑制吗啡的中枢镇痛作用。尾核内给药40 min后，吗啡+Apelin组痛阈变化率为3.03％±0.69％，与吗啡组18.35％±1.64％比较显著降低，有统计学意义。尾核内给药后，在90 min的观察期内，纳络酮+Apelin组大鼠痛阈与生理盐水组相比显著降低，与Apelin组相比显著升高。
3.大鼠尾核内微量注射0.5μl不同浓度的Apelin 40min后发现，大鼠尾核与血浆内cAMP含量呈现不同程度的降低，其中Apelin浓度为10-4mol/L组大鼠尾核cAMP含量为14.08±2.25 nmol/g，血浆cAMP含量为19.94±4.43 nmol/L，分别与生理盐水组(133.05±20.41 nmol/g、38.66±6.73 nmol/L)比较，有非常显著的统计学意义。
大鼠尾核内微量注射0.5μl不同浓度的Apelin 40min后，大鼠尾核与血浆内cGMP含量与生理盐水组比较，无统计学意义。
4.大鼠尾核内微量注射0.5μl吗啡，5 min后再注射0.5μl Apelin(10-4 mol/L)，给药40 min后发现，吗啡+Apelin组大鼠尾核cAMP含量为56.49±10.53 nmol/g，血浆cAMP含量为13.36±2.95 nmol/L，分别与生理盐水组(126.34±12.3 nmol/g、36.87±3.61 nmol/L)比较显著降低，有统计学意义，与吗啡组(73.19±11.23 nmol/g、27.95±1.55nmol/L)比较显著降低，有统计学意义，与Apelin组(51.90±11.72 nmol/g、15.29±5.58 nmol/L)比较无统计学意义。大鼠尾核内微量注射0.5μl吗啡5 min后再注射0.5μl Apelin(10-4 mol/L)，给药40min后结果表明，吗啡+Apelin组大鼠尾核与血浆内cGMP含量分别与生理盐水组、吗啡组比较无统计学意义。
结论:
1.尾核内微量注射Apelin后，Apelin能够易化大鼠的热伤害反应，表现为显著的痛敏作用。Apelin在10-3 mol/L～10-6mol/L的范围内均表现明显的痛敏作用，在10-4 mol/L时作用最显著。
2.大鼠尾核内微量注射吗啡5 min后再注射Apelin(10-4 mol/L)，结果显示Apelin能够抑制吗啡的镇痛作用。
3.Apelin的痛敏作用可能通过细胞内第二信使cAMP发挥效应。