论文部分内容阅读
目的:选用同步化液体培养8天生物碱含量差异最明显的C20hi和C20D为实验材料,采用半定量RT-PCR技术和斑点杂交技术获得C20hi和C20D在转录水平上差异表达的基因片段,结合Northernblotting结果,初步分析长春花细胞C20hi生物碱超量合成及激素自养的分子机制。
结果:克隆了长春花细胞C20hi和C20D异胡豆苷合成酶基因mRNA序列的全长,分析二者的基因序列完全相同;采用半定量RT-PCR技术比较C20hi和C20D色氨酸脱羧酶基因(tdc)、裂环马钱子苷合成酶基因(sls)、异胡豆苷合成酶基因(sss)、异胡豆苷β-葡萄糖苷酶基因(sgd)、邻氨基苯甲酸合成酶基因(asa)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因(hmgr)和牻牛儿醇10-羟化酶基因(g10h)在转录水平上的表达量,结果发现C20hi中tdc、sls、sss、sgd、asa、hmgr和g10h表达量高于C20D;采用斑点杂交技术筛选长春花细胞C20hi和C20D抑制性差减杂交cDNA文库,共得到112个在转录水平上差异表达的基因片段。
讨论:长春花细胞C20hi中色胺含量高于C20D,可能由于C20hi中tdc在转录水平上的过量表达,生长素2,4-D可能负调控tdc、sss、g10h、sls、sgd、hmgr、asa、CrPS基因和PNAE基因在转录水平上的表达。这些基因在C20hi中的过量表达可能与该细胞超量合成阿玛碱和蛇根碱有关。长春花细胞C20hi激素自养是一种生理适应现象,HyPRP基因在转录水平上的过量表达可能与C20hi激素自养有关。Northernblotting结果表明C20hi中可能存在着内源性生长素信号传导通路。